| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 缩略语表 | 第15-17页 |
| 第1章 文献综述 | 第17-51页 |
| ·猪链球菌病 | 第17-32页 |
| ·前言 | 第17-18页 |
| ·病原学 | 第18页 |
| ·流行病学 | 第18-19页 |
| ·传播途径 | 第18页 |
| ·传染源 | 第18页 |
| ·易感动物 | 第18页 |
| ·流行特点 | 第18-19页 |
| ·血清型 | 第19-20页 |
| ·毒力(相关)因子 | 第20-25页 |
| ·荚膜多糖 | 第21页 |
| ·溶菌酶释放蛋白和胞外因子 | 第21-22页 |
| ·溶血素 | 第22页 |
| ·纤连蛋白结合蛋白 | 第22页 |
| ·猪链球菌类细菌素抑制物 | 第22-23页 |
| ·Sortase | 第23页 |
| ·透明质酸裂解酶 | 第23-24页 |
| ·诱导噬菌体 | 第24页 |
| ·超抗原 | 第24-25页 |
| ·其它 | 第25页 |
| ·基因分型 | 第25-28页 |
| ·核糖体基因分型法 | 第26-27页 |
| ·脉冲场凝胶电泳法 | 第27页 |
| ·限制性内切酶消化指纹分析法 | 第27页 |
| ·多位点序列分型 | 第27-28页 |
| ·随机扩增多态性DNA | 第28页 |
| ·其它 | 第28页 |
| ·致病机理 | 第28-29页 |
| ·脑膜炎 | 第28-29页 |
| ·CPS抗吞噬作用 | 第29页 |
| ·嗜中性粒细胞 | 第29页 |
| ·临床症状 | 第29页 |
| ·诊断 | 第29-30页 |
| ·病床诊断 | 第29-30页 |
| ·病原学检测 | 第30页 |
| ·PCR法 | 第30页 |
| ·抗体检测方法 | 第30页 |
| ·治疗和预防 | 第30-32页 |
| ·抗生素治疗 | 第30-31页 |
| ·疫苗 | 第31-32页 |
| ·灭活苗 | 第31页 |
| ·亚单位苗 | 第31-32页 |
| ·胶体金免疫层析研究 | 第32-44页 |
| ·胶体金介绍 | 第32页 |
| ·胶体金标记技术 | 第32-33页 |
| ·胶体金的制备 | 第33-34页 |
| ·柠檬酸三钠还原法 | 第33页 |
| ·柠檬酸三钠-鞣酸混合还原法 | 第33页 |
| ·白磷还原法 | 第33-34页 |
| ·硼氢化钠还原法 | 第34页 |
| ·抗坏血酸还原法 | 第34页 |
| ·鞣酸还原法 | 第34页 |
| ·胶体金溶液及胶体金颗粒状态 | 第34页 |
| ·胶体金标记物的制备 | 第34-37页 |
| ·胶体金标记蛋白质 | 第34-35页 |
| ·胶体金标记SPA的方法 | 第35页 |
| ·胶体金溶液制备及蛋白标记时应该注意的事项 | 第35-37页 |
| ·胶体金的应用 | 第37-38页 |
| ·胶体金在电镜水平的应用 | 第37页 |
| ·胶体金在光镜水平的应用 | 第37-38页 |
| ·胶体金在流式细胞仪分析中的应用 | 第38页 |
| ·免疫印迹技术 | 第38页 |
| ·免疫层析法: | 第38-44页 |
| ·免疫层析试纸条 | 第39页 |
| ·免疫层析试纸条反应原理 | 第39-42页 |
| ·竞争法试纸条反应原理 | 第40页 |
| ·双抗夹心法试纸条反应原理 | 第40-41页 |
| ·G-SPA探针法试纸条反应原理 | 第41-42页 |
| ·制备试纸条试剂的选择 | 第42页 |
| ·原材料的选择 | 第42-43页 |
| ·硝酸纤维素膜(NC膜)的选择 | 第42页 |
| ·样品垫的选择 | 第42-43页 |
| ·连接垫的选择 | 第43页 |
| ·吸水垫的选择 | 第43页 |
| ·背衬的选择 | 第43页 |
| ·胶体金免疫层析试纸条的应用 | 第43-44页 |
| ·酵母双杂交技术 | 第44-51页 |
| ·酵母双杂交技术介绍 | 第44-45页 |
| ·酵母双杂交技术原理 | 第45-47页 |
| ·Cyto-Trap酵母双杂交技术原理 | 第45-46页 |
| ·传统酵母双杂交技术原理 | 第46-47页 |
| ·Cyto-Trap酵母双杂交技术与传统酵母双杂交技术比较 | 第47-48页 |
| ·酵母双杂交技术的应用 | 第48-51页 |
| ·寻找与靶蛋白相互作用的蛋白质 | 第48页 |
| ·寻找蛋白—蛋白相互作用的结构域 | 第48页 |
| ·寻找具有治疗作用的小分子多肽 | 第48-49页 |
| ·寻找与调控蛋白相互作用的化合物 | 第49页 |
| ·绘制蛋白质组相互作用网络 | 第49-51页 |
| 第2章 猪链球菌2型抗体检测试纸条的制备及应用研究 | 第51-70页 |
| ·前言 | 第51-52页 |
| ·材料与方法 | 第52-60页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·主要缓冲液 | 第52页 |
| ·原材料 | 第52-53页 |
| ·菌株 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·血清样品 | 第53页 |
| ·细菌分离与培养 | 第53-54页 |
| ·革兰氏染色 | 第54页 |
| ·溶血试验 | 第54页 |
| ·生化试验 | 第54页 |
| ·药敏试验 | 第54页 |
| ·血清型鉴定 | 第54页 |
| ·PCR方法鉴定 | 第54-55页 |
| ·荚膜多糖的提取和纯化 | 第55-56页 |
| ·胶体金溶液的制备 | 第56页 |
| ·最佳蛋白标记量的确定 | 第56页 |
| ·胶体金标记SPA | 第56-57页 |
| ·点样 | 第57页 |
| ·试纸条的组装 | 第57页 |
| ·试纸条检测方法、原理及结果判定 | 第57-58页 |
| ·高免血清的制备 | 第58-59页 |
| ·抗原的制备 | 第58页 |
| ·免疫接种及样品采集 | 第58-59页 |
| ·ELISA方法的建立 | 第59页 |
| ·检测SS2康复血清 | 第59页 |
| ·检测高免血清 | 第59页 |
| ·检测临床血清样品 | 第59页 |
| ·检测阳性血清抗体滴度 | 第59-60页 |
| ·保质期试验 | 第60页 |
| ·结果 | 第60-66页 |
| ·革兰氏染色 | 第60页 |
| ·溶血试验 | 第60-61页 |
| ·生化试验 | 第61页 |
| ·药敏试验 | 第61页 |
| ·血清型鉴定 | 第61页 |
| ·PCR结果 | 第61-62页 |
| ·胶体金溶液的制备 | 第62页 |
| ·捕获试剂的浓度及点样速度 | 第62-63页 |
| ·检测SS2康复血清结果 | 第63页 |
| ·检测高免血清结果 | 第63-64页 |
| ·检测临床血清结果 | 第64-65页 |
| ·检测阳性血清抗体滴度 | 第65-66页 |
| ·保质期试验 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-70页 |
| ·SS2及链球菌病 | 第66页 |
| ·血清学检测意义 | 第66-67页 |
| ·胶体金标记及快速检测技术 | 第67页 |
| ·点样量的确定 | 第67页 |
| ·葡萄球菌A蛋白 | 第67-68页 |
| ·试纸条原材料的选择 | 第68页 |
| ·交叉反应 | 第68页 |
| ·抗CPS抗体滴度 | 第68-69页 |
| ·敏感性的比较 | 第69页 |
| ·SS2抗体检测方法比较 | 第69页 |
| ·总结 | 第69-70页 |
| 第3章 FBPS与宿主细胞蛋白相互作用研究 | 第70-104页 |
| ·前言 | 第70页 |
| ·材料与方法 | 第70-90页 |
| ·主要试剂 | 第70-71页 |
| ·主要缓冲液 | 第71-73页 |
| ·质粒抽提相关溶液 | 第71-72页 |
| ·SDS-PAGE缓冲液 | 第72页 |
| ·Western-blotting缓冲液 | 第72-73页 |
| ·其它缓冲液 | 第73页 |
| ·菌株、细胞株及质粒 | 第73-77页 |
| ·菌株 | 第73页 |
| ·细胞株 | 第73页 |
| ·pMD18-T克隆载体 | 第73-74页 |
| ·pSos Bait载体 | 第74-75页 |
| ·pMyr Target载体 | 第75-76页 |
| ·pcDNA/3.1-myc-His表达载体 | 第76-77页 |
| ·pET-28表达载体 | 第77页 |
| ·引物 | 第77-78页 |
| ·扩增Fbps所用引物 | 第77-78页 |
| ·扩增API 5所用引物 | 第78页 |
| ·扩增ZFYVE 27所用引物 | 第78页 |
| ·培养基 | 第78-80页 |
| ·cDNA文库 | 第80页 |
| ·试剂盒 | 第80页 |
| ·SS2基因组DNA的制备 | 第80页 |
| ·PCR扩增Fbps基因 | 第80页 |
| ·pMD-18T-Fbps克隆载体的构建及测序 | 第80-82页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第80页 |
| ·连接反应 | 第80-81页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第81页 |
| ·连接产物的转化 | 第81页 |
| ·质粒DNA的小量制备(碱裂解法) | 第81页 |
| ·质粒DNA的大量制备(碱裂解法) | 第81-82页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第82页 |
| ·pSos-Fbps及pET-28c-Fbps重组载体的构建 | 第82-83页 |
| ·cDNA文库扩增 | 第83页 |
| ·cdc25H酵母细胞表型的鉴定 | 第83页 |
| ·pSos-Fbps自激活活性的验证 | 第83-84页 |
| ·共转化cdc25H酵母细胞及培养 | 第84-85页 |
| ·菌落的复制培养及候选阳性克隆的选择 | 第85页 |
| ·转化效率的计算 | 第85页 |
| ·候选阳性克隆Target质粒的提取 | 第85页 |
| ·候选阳性克隆质粒的扩增及酶切鉴定 | 第85-86页 |
| ·Target质粒自激活活性的验证 | 第86页 |
| ·阳性质粒DNA测序及分析: | 第86页 |
| ·FBPS原核表达 | 第86-87页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第86-87页 |
| ·Western-blotting检测FBPS表达产物 | 第87页 |
| ·API 5和ZFYVE 27的克隆 | 第87-88页 |
| ·pcDNA3.1/myc-His-API 5和pcDNA3.1/myc-His-ZFYVE 27的构建 | 第88页 |
| ·API 5和ZFYVE 27的真核表达 | 第88-89页 |
| ·Western-blotting检测API 5和ZFYVE 27表达产物 | 第89页 |
| ·免疫共沉淀试验 | 第89-90页 |
| ·结果 | 第90-97页 |
| ·PCR扩增Fbps | 第90-91页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第91页 |
| ·cdc25H酵母细胞表型的鉴定 | 第91-92页 |
| ·pSos-Fbps自激活活性的验证 | 第92页 |
| ·共转化cdc25H酵母细胞及阳性克隆的筛选 | 第92-93页 |
| ·转化效率的计算 | 第93页 |
| ·Target质粒自激活活性的验证 | 第93-94页 |
| ·Target质粒酶切鉴定 | 第94-95页 |
| ·测序及BLAST分析 | 第95页 |
| ·SDS-PAGE和Western-blotting检测FBPS原核表达 | 第95页 |
| ·PCR扩增API 5和ZFYVE 27 | 第95-96页 |
| ·重组表达载体的酶切鉴定 | 第96页 |
| ·API 5和ZFYVE 27的真核表达 | 第96-97页 |
| ·免疫共沉淀试验 | 第97页 |
| ·讨论 | 第97-104页 |
| ·猪链球菌与宿主相互作用研究 | 第97-98页 |
| ·酵母双杂交技术的应用 | 第98页 |
| ·CytoTrap酵母双杂交系统 | 第98页 |
| ·FBPS与SS2致病性的关系 | 第98-99页 |
| ·API 5的功能及其与致病的关系 | 第99页 |
| ·ZFYVE 27的功能及其与致病的关系 | 第99-100页 |
| ·cDNA文库 | 第100页 |
| ·Bait蛋白自激活作用 | 第100-101页 |
| ·Target蛋白的自激活作用 | 第101页 |
| ·酵母细胞回复突变频率 | 第101页 |
| ·感受态细胞的制备及转化效率 | 第101-102页 |
| ·未调到FN或其亚基的原因 | 第102页 |
| ·免疫共沉淀试验 | 第102页 |
| ·总结 | 第102-104页 |
| 第4章 全文总结 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-124页 |
| Curriculum Vitae | 第124-125页 |
| 发表的主要论文 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 附录 | 第127-130页 |
| 附录1 | 第127-129页 |
| 附录2 | 第129-130页 |
