| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第14-37页 |
| ·RNA 沉默 | 第14-19页 |
| ·RNA 沉默的发现 | 第14-15页 |
| ·RNA 沉默的机制 | 第15-17页 |
| ·转录后基因沉默的抑制 | 第17-18页 |
| ·植物转录后基因沉默在病毒-寄主互作中的作用 | 第18-19页 |
| ·病毒介导的基因沉默（VIGS） | 第19-26页 |
| ·病毒介导的基因沉默的机制 | 第19-21页 |
| ·VIGS 病毒载体 | 第21-23页 |
| ·VIGS 的应用 | 第23-25页 |
| ·VIGS 的抑制 | 第25-26页 |
| ·RNA 介导的植物对病毒的抗性 | 第26-27页 |
| ·RDR 与RNA 沉默 | 第27-29页 |
| ·烟草中的RDR1 与RDR6 | 第29-31页 |
| ·传递性RNA 沉默 | 第31-34页 |
| ·本研究的研究内容及目的意义 | 第34-36页 |
| ·本研究的研究内容 | 第34-35页 |
| ·本研究的目的意义 | 第35-36页 |
| ·技术路线 | 第36-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-54页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·菌株和载体 | 第37页 |
| ·常用缓冲液及培养基的配制 | 第37页 |
| ·常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-54页 |
| ·Nt-RDR1 的3736p 片段的获得 | 第37-42页 |
| ·VIGS 载体构建 | 第42-44页 |
| ·重组质粒的农杆菌转化 | 第44-45页 |
| ·农杆菌渗入（Agroinfiltration） | 第45-46页 |
| ·水杨酸诱导植株处理 | 第46页 |
| ·烟草叶片总 RNA 的提取（Trizol 法） | 第46页 |
| ·紫外检测RNA 产率和纯度 | 第46-47页 |
| ·反转录cDNA 第一链的合成 | 第47页 |
| ·VIGS 载体注射后靶标基因Nt-RDR1 的RT-PCR 检测 | 第47-48页 |
| ·荧光定量PCR 检测 | 第48-50页 |
| ·Northern 杂交检测 | 第50-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-69页 |
| ·Nt-RDR1 的3736p 片段的获得 | 第54页 |
| ·VIGS 载体构建 | 第54-55页 |
| ·VIGS 载体处理本氏烟后靶标基因Nt-RDR1 的Real Time PCR 检测 | 第55-59页 |
| ·VIGS 载体处理本氏烟后植株总RNA 的提取 | 第55-56页 |
| ·VIGS 载体处理本氏烟后植株沉默RDR1 基因症状 | 第56页 |
| ·VIGS 载体处理本氏烟的RT-PCR 检测 | 第56-57页 |
| ·VIGS 载体处理本氏烟的Real Time PCR 检测 | 第57-59页 |
| ·VIGS 载体注射转基因烟草K58 及靶标基因Nt-RDR1 的Real Time PCR 检测.. | 第59-69页 |
| ·VIGS 载体处理转基因烟草K58 | 第59-60页 |
| ·VIGS 载体处理转基因烟草K58 后植株总RNA 的提取 | 第60页 |
| ·处理转基因烟草K58 植株的RT-PCR 检测 | 第60-61页 |
| ·荧光定量PCR 检测 | 第61-63页 |
| ·Northern 杂交检测转基因烟草K58 植株RDR1 基因的沉默 | 第63页 |
| ·处理转基因烟草K58 接种PVY~N 的检测 | 第63-69页 |
| 4 讨论 | 第69-73页 |
| ·RDR1 基因对病毒积累的影响 | 第69页 |
| ·RDR1 基因在本氏烟和普通烟中的沉默 | 第69-70页 |
| ·RDR1 对沉默向上游（3’-5’方向）延伸的影响 | 第70-71页 |
| ·温度对沉默向上游（3’-5’方向）延伸的影响 | 第71-72页 |
| ·对于本研究的改进 | 第72-73页 |
| 5 结论 | 第73-74页 |
| ·RDR1 基因的沉默只能在本氏烟中系统发生 | 第73页 |
| ·RDR1 基因被抑制的情况下，病毒积累量增加，沉默效果较低 | 第73页 |
| ·温度对沉默延伸距离的影响较大 | 第73页 |
| ·本实验中靠近CP 基因的片段沉默效果要低于远离CP 基因的片段 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-83页 |
| 附录I 常用缓冲液及培养基的配制 | 第83-86页 |
| 附录II 常用化学试剂、分子生物学试剂 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 硕士学位论文内容简介及自评 | 第88页 |
