| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-27页 |
| 1 马铃薯病毒病 | 第13-16页 |
| ·马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX) | 第13-14页 |
| ·马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和马铃薯A病毒(Potato virus,PVA) | 第14页 |
| ·马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS)和马铃薯M病毒(Potato virus M,PVM) | 第14-15页 |
| ·马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV) | 第15-16页 |
| 2 马铃薯抗病毒基因工程的研究进展 | 第16-18页 |
| ·CP基因介导的抗病性 | 第17页 |
| ·复制酶基因介导的抗病性 | 第17页 |
| ·反义RNA介导的抗病性 | 第17页 |
| ·核酶介导的抗病性 | 第17-18页 |
| ·缺陷干扰颗粒介导的抗性 | 第18页 |
| ·病毒运动蛋白基因介导的抗性 | 第18页 |
| 3 马铃薯病毒检测技术 | 第18-26页 |
| ·生物学方法 | 第19页 |
| ·电镜检测方法 | 第19-20页 |
| ·分子生物学方法 | 第20-22页 |
| ·RT-PCR检测技术 | 第20-21页 |
| ·核酸杂交检测技术 | 第21页 |
| ·核酸序列扩增检测技术 | 第21-22页 |
| ·免疫学检测方法 | 第22-25页 |
| ·反向被动血细胞凝集反应 | 第22页 |
| ·流式细胞仪法 | 第22页 |
| ·酶联免疫吸附测定法 | 第22-24页 |
| ·病毒抗血清的制备 | 第24-25页 |
| ·血清学与分子生物学技术的比较 | 第25-26页 |
| 4 研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 材料与方法 | 第27-39页 |
| 1 材料 | 第27-28页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·菌种和载体 | 第27页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第27页 |
| ·引物的设计与合成 | 第27-28页 |
| 2 方法 | 第28-39页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第28页 |
| ·cDNA的合成 | 第28页 |
| ·PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的回收(Ultrafree-DA) | 第29页 |
| ·PLRV-CP基因的克隆 | 第29-31页 |
| ·PCR产物与克隆载体的T-A连接 | 第29页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态的制备 | 第29页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌DH5α | 第29-30页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第30-31页 |
| ·DNA序列的测定 | 第31页 |
| ·PLRV-CP基因原核表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·PLRV-CP基因的缺失突变 | 第32-33页 |
| ·PCR反应 | 第32页 |
| ·Blunt and Kination反应 | 第32-33页 |
| ·Ligation反应(环化) | 第33页 |
| ·缺失突变体的筛选 | 第33页 |
| ·DNA序列测定 | 第33页 |
| ·PLRV-CP基因原核表达的诱导 | 第33页 |
| ·表达蛋白的鉴定 | 第33-35页 |
| ·SDS-PAGE鉴定 | 第33-34页 |
| ·Western blotting检测 | 第34-35页 |
| ·细菌总蛋白的提取与目的蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| ·细菌总蛋白的提取 | 第35页 |
| ·目的蛋白的纯化(HiTrap Chelating HP) | 第35-36页 |
| ·蛋白的透析与浓缩 | 第36页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第36页 |
| ·抗血清的制备 | 第36-37页 |
| ·融合蛋白抗血清的制备 | 第36-37页 |
| ·抗血清效价测定 | 第37页 |
| ·PLRV的间接ELISA检测 | 第37-39页 |
| 结果与分析 | 第39-57页 |
| 1 PLRV-CP基因的RT-PCR扩增 | 第39-40页 |
| 2 PLRV-CP基因的克隆 | 第40-41页 |
| 3 cDNA序列的测定与分析 | 第41-45页 |
| 4 PLRV-CP基因原核表达载体的构建 | 第45-49页 |
| 5 LRCP-3基因的缺失突变 | 第49-53页 |
| 6 目的蛋白的诱导与鉴定 | 第53-54页 |
| 7 蛋白的提取与纯化 | 第54-55页 |
| 8 抗血清的制备 | 第55-56页 |
| 9 PLRV的间接ELISA检测 | 第56-57页 |
| 讨论 | 第57-60页 |
| 1 PLRV-CP基因的RT-PCR扩增 | 第57页 |
| 2 表达系统和表达载体的选择 | 第57-58页 |
| 3 PLRV-CP基因的原核表达 | 第58-59页 |
| 4 基因工程途径制备PLRV抗血清 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 1 PLRV-CP基因的克隆 | 第60页 |
| 2 原核表达载体的构建 | 第60页 |
| 3 目的蛋白的表达与纯化 | 第60页 |
| 4 抗血清的制备 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 缩略语表 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
