| 第一章 基因表达调控中的启动子与增强子元件 | 第1-22页 |
| ·启动子元件及其研究方法 | 第14-18页 |
| ·启动子的组成元件 | 第14-16页 |
| ·启动子相关的研究方法 | 第16-18页 |
| ·增强子元件及其相关研究方法 | 第18-22页 |
| ·增强子的结构与作用特点 | 第18-20页 |
| ·增强子的功能及其作用方式 | 第20-22页 |
| 第二章 研究目的与内容 | 第22-28页 |
| ·研究目的 | 第22-23页 |
| ·研究内容 | 第23-25页 |
| ·半补齐法构建BmNPV基因组文库 | 第23页 |
| ·利用BmNPV基因组文库筛选反式激活因子及文库功能评价 | 第23-24页 |
| ·介导同源重复区增强子反式激活作用的病毒因子的鉴定 | 第24页 |
| ·杆状病毒新型非hr增强子的发现及其功能研究 | 第24-25页 |
| ·利用立即早期ie-1启动子与hr3增强子构建的新型杆状病毒表达载体 | 第25页 |
| ·Pfu DNA聚合酶基因的克隆、表达及其在高保真PCR中的应用 | 第25页 |
| ·研究意义 | 第25-28页 |
| ·半补齐法构建BmNPV基因组文库 | 第25-26页 |
| ·利用BmNPV文库筛选反式激活因子 | 第26页 |
| ·病毒因子IE-1介导同源重复区增强子反式激活作用 | 第26-27页 |
| ·杆状病毒非同源重复区增强子的发现及其增强作用研究 | 第27页 |
| ·携带增强子的新型杆状病毒载体表达效果研究 | 第27页 |
| ·利用家蚕表达Pfu DNA聚合酶以及表达产物在高保真PCR中的应用 | 第27-28页 |
| 第三章 材料和方法 | 第28-38页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·质粒和菌种 | 第28页 |
| ·病毒株、昆虫细胞和家蚕 | 第28页 |
| ·酶试剂及试剂盒 | 第28-29页 |
| ·其它主要试剂 | 第29页 |
| ·细菌培养基 | 第29页 |
| ·昆虫细胞培养基 | 第29页 |
| ·常用溶液及缓冲液 | 第29-30页 |
| ·所用主要仪器和设备 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-38页 |
| ·细胞的传代 | 第30-31页 |
| ·细胞的冻存 | 第31页 |
| ·细胞的复苏 | 第31页 |
| ·功能质粒由脂质体介导在昆虫细胞中的转染 | 第31-32页 |
| ·功能质粒在细胞或家蚕幼虫中转染后的病毒反式激活处理 | 第32页 |
| ·细胞的病毒感染 | 第32页 |
| ·亲本病毒共转染 | 第32页 |
| ·重组病毒的筛选和鉴定 | 第32-33页 |
| ·细胞计数 | 第33页 |
| ·碱法少量快速抽提质粒DNA | 第33页 |
| ·碱法大量制备质粒DNA | 第33-34页 |
| ·限制性内切酶反应 | 第34页 |
| ·玻璃奶法纯化回收DNA片段 | 第34页 |
| ·DNA的连接 | 第34页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第35页 |
| ·BmNPV包涵体病毒基因组DNA的制备 | 第35页 |
| ·游离病毒基因组DNA的制备 | 第35-36页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第36-37页 |
| ·荧光素酶分析 | 第37页 |
| ·DNA浓度测定 | 第37-38页 |
| 第四章 半补齐法构建BmNPV基因组文库 | 第38-43页 |
| ·材料与方法 | 第39-41页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-43页 |
| 第五章 用BmNPV随机文库筛选杆状病毒因子的研究 | 第43-51页 |
| ·材料与方法 | 第44-45页 |
| ·转染质粒 | 第44页 |
| ·昆虫细胞转染效率内参系统的建立 | 第44页 |
| ·24孔细胞培养板转染实验实现对文库的高通量筛选 | 第44页 |
| ·主要早期基因的扩增与克隆 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-49页 |
| ·转染效率内参系统的建立 | 第45-47页 |
| ·利用文库筛选helicase启动子的反式激活因子 | 第47页 |
| ·ie-1及其它主要早期基因的克隆及其产物的反式激活效果 | 第47-48页 |
| ·IE-1对其它米源启动子的反式激活作用 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第六章 IE-1因子介导同源重复区hr3发挥增强子反式激活作用 | 第51-61页 |
| ·材料与方法 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-58页 |
| ·病毒介导下hr3增强子能发挥反式作用 | 第52-53页 |
| ·随机文库筛选介导hr3增强子发挥反式作用的病毒因子 | 第53-55页 |
| ·同源重复区增强子在反式作用中的结构单元 | 第55-58页 |
| ·讨论 | 第58-61页 |
| 第七章 杆状病毒非同源重复区增强子的发现及其功能鉴定 | 第61-74页 |
| ·材料与方法 | 第62-63页 |
| ·文库及其它质粒的构建 | 第62页 |
| ·ie-1启动子不同长度亚片段的扩增及克隆 | 第62页 |
| ·238 bp ie-1启动子亚片段与不同启动子报告质粒的顺式连接载体构建 | 第62-63页 |
| ·同时含有238 bp片段与同源重复区增强子报告质粒的构建 | 第63页 |
| ·此238 bp元件在Sf细胞以及家蚕活体中的功能分析 | 第63页 |
| ·转染、共转染 | 第63页 |
| ·结果 | 第63-71页 |
| ·BmNPV随机文库92#质粒DNA具有反式激活靶启动子转录活性 | 第63-64页 |
| ·378 bp ie-1启动子质粒具有反式激活靶启动子的能力 | 第64页 |
| ·ie-1启动子不同长度亚片段在反式激活中的作用 | 第64-66页 |
| ·顺式构象下对靶启动子的激活作用 | 第66-67页 |
| ·NHE能识别多种类型启动子 | 第67-69页 |
| ·NHE能与同源重复区增强子协同作用于靶启动子 | 第69-70页 |
| ·NHE在Sf细胞以及家蚕活体中的增强作用 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-74页 |
| 第八章 利用极早期启动子与增强子构建新型杆状病毒表达载体的研究 | 第74-79页 |
| ·材料与方法 | 第75-76页 |
| ·材料 | 第75页 |
| ·新型表达载体的构建 | 第75页 |
| ·重组病毒的获得 | 第75页 |
| ·OPD在家蚕BEVS中的表达 | 第75页 |
| ·OPD酶活性测定 | 第75-76页 |
| ·标准曲线制作 | 第76页 |
| ·结果 | 第76-77页 |
| ·含ie-1启动子与hr3增强子的转移载体构建 | 第76页 |
| ·同源重组及重组病毒的筛选 | 第76页 |
| ·重组病毒在家蚕中的表达及活力测定 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| 第九章 Pfu DNA聚合酶基因的克隆、表达及其在高保真PCR中的应用 | 第79-86页 |
| ·材料和方法 | 第80-82页 |
| ·材料 | 第80页 |
| ·Pyrococcus furiosus培养以及基因组DNA提取 | 第80页 |
| ·Pfu DNA polymerase基因的扩增及转移载体构建 | 第80-81页 |
| ·重组病毒的获得 | 第81页 |
| ·Pfu DNA聚合酶在家蚕BEVS中的表达 | 第81页 |
| ·一步法热变性纯化Pfu DNA聚合酶及其SDS-PAGE电泳 | 第81页 |
| ·Pfu DNA聚合酶在高保真PCR中的应用 | 第81-82页 |
| ·结果 | 第82-84页 |
| ·Pfu DNA聚合酶基因的克隆 | 第82页 |
| ·含Pfu DNA聚合酶基因的重组BmNPV的获得 | 第82页 |
| ·重组病毒在家蚕中的表达及一步法纯化Pfu DNA聚合酶 | 第82页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第82-83页 |
| ·Pfu DNA聚合酶在高保真PCR中的应用 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-86页 |
| 第十章 结论 | 第86-89页 |
| ·半补齐法构建BmNPV基因组随机文库 | 第86页 |
| ·用BmNPV随机文库筛选杆状病毒因子 | 第86-87页 |
| ·IE-1因子介导同源重复区hr3发挥增强子反式激活作用 | 第87页 |
| ·杆状病毒非同源重复区增强子的发现及其功能鉴定 | 第87-88页 |
| ·利用极早期启动子与增强子构建新型杆状病毒表达载体的研究 | 第88页 |
| ·Pfu DNA聚合酶基因的克隆、表达及其在高保真PCR中的应用 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 作者简历 | 第101-104页 |
