| 1 引言 | 第1-15页 |
| ·简史 | 第9页 |
| ·乙脑危害 | 第9-10页 |
| ·乙脑流行特征 | 第10页 |
| ·乙脑病毒的病原学特性 | 第10-11页 |
| ·乙脑的致病机制 | 第11页 |
| ·乙脑病毒的分子生物学特性 | 第11-13页 |
| ·乙脑的诊断 | 第13页 |
| ·乙脑的防治 | 第13-15页 |
| 2 材料和方法 | 第15-26页 |
| ·毒株与细胞 | 第15页 |
| ·实验动物 | 第15页 |
| ·反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)所需主要试剂 | 第15页 |
| ·SPA协同凝集所需主要试剂 | 第15-16页 |
| ·菌种 | 第15页 |
| ·培养基 | 第15-16页 |
| ·0.01M pH7.4 PBS缓冲液 | 第16页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，免疫电泳及水平电泳所需主要试剂 | 第16-17页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳所需试剂 | 第16页 |
| ·水平电泳所需试剂 | 第16页 |
| ·免疫电泳所需主要试剂 | 第16-17页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·病毒的增殖及抗血清的制备 | 第17-18页 |
| ·JEV SA14-14-2毒株接种鸡胚 | 第17页 |
| ·JEV SA14-14-2毒株脑内接种乳鼠 | 第17页 |
| ·兔抗鸡胚毒血清制备 | 第17-18页 |
| ·反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第18-20页 |
| ·引物设计与合成 | 第18页 |
| ·病毒增殖 | 第18页 |
| ·核酸提取 | 第18-19页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第19页 |
| ·RT-PCR产物酶切分析 | 第19页 |
| ·RT-PCR特异性实验 | 第19-20页 |
| ·RT-PCR敏感性测定 | 第20页 |
| ·临床检测 | 第20页 |
| ·SPA协同凝集试验 | 第20-22页 |
| ·SPA菌稳定液的制备 | 第20页 |
| ·SPA菌诊断液的制备(即将上述稳定液与已知的抗血清结合) | 第20页 |
| ·鼠脑毒的组织培养半数致死量(TCID_(50))测定及中和试验 | 第20-21页 |
| ·鼠脑毒检出浓度及兔抗鸡胚毒抗血清最佳标记浓度的确定 | 第21-22页 |
| ·JEV SPA诊断液的特异性试验 | 第22页 |
| ·对比免疫电泳实验 | 第22页 |
| ·SPA诊断液的保存期测定 | 第22页 |
| ·检测部位的确定 | 第22页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳同收纯化JEV蛋白抗原成分 | 第22-26页 |
| ·JEV鸡胚毒的增殖 | 第22-23页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶的配制 | 第23页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳确定回收蛋白的分子量 | 第23-24页 |
| ·从SDS-聚丙烯酰胺凝胶中电洗脱目的回收蛋白 | 第24页 |
| ·回收的蛋白免疫豚鼠 | 第24-25页 |
| ·琼脂扩散试验检测豚鼠抗血清效价 | 第25页 |
| ·SPA-协同凝集试验检测豚鼠抗血清阳性 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-35页 |
| ·病毒的增殖及抗血清的制备 | 第26-27页 |
| ·鸡胚毒的增殖 | 第26页 |
| ·鼠脑毒的增殖 | 第26页 |
| ·兔抗鸡胚毒免疫血清的制备结果 | 第26-27页 |
| ·反转录-聚合酶链式反应结果 | 第27-29页 |
| ·RT-PCR扩增结果 | 第27页 |
| ·RT-PCR扩增产物酶切分析结果 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR特异性结果 | 第28页 |
| ·RT-PCR敏感性结果 | 第28-29页 |
| ·临床检测结果 | 第29页 |
| ·SPA协同凝集试验结果 | 第29-33页 |
| ·鼠脑毒TCID_(50)测定及中和试验结果 | 第29-30页 |
| ·鼠脑毒检出浓度的确定 | 第30-31页 |
| ·兔抗鸡胚毒血清最佳标记浓度的确定 | 第31页 |
| ·JEV SPA诊断液的特异性试验结果 | 第31页 |
| ·免疫电泳实验结果 | 第31-32页 |
| ·SPA诊断液的保存期测定 | 第32页 |
| ·检测部位的确定 | 第32-33页 |
| ·从聚丙烯酰胺凝胶中回收纯化乙脑病毒蛋白抗原成分 | 第33-35页 |
| ·SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳对回收蛋白分子量的确定 | 第33页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳确证回收效果 | 第33-34页 |
| ·豚鼠抗血清效价测定 | 第34页 |
| ·SPA协同凝集试验检测豚鼠血清阳性 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| ·乙脑病毒检测的难点 | 第35页 |
| ·RT-PCR技术是一种快速敏感特异的检测乙脑病毒的方法 | 第35页 |
| ·Trizol法提取乙脑病毒的核酸 | 第35-36页 |
| ·抽提RNA病毒核酸时应注意的问题 | 第36页 |
| ·葡萄球菌A蛋白的特点 | 第36页 |
| ·影响SPA协同凝集试验的因素 | 第36-37页 |
| ·SPA协同凝集试验适用于临床快速检测 | 第37页 |
| ·从聚丙烯酰胺凝胶中回收纯化乙型脑炎病毒蛋白抗原成分 | 第37-38页 |
| 5 结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-42页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第42-43页 |
| 作者简历 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44页 |
