| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-11页 |
| 缩写词表 | 第11-16页 |
| 第一章 植物油脂代谢及其基因工程调控方法 | 第16-39页 |
| 第一节 植物油脂生物合成的基本途径 | 第16-20页 |
| 第二节 油脂生物合成的酶的鉴定及其基因 | 第20-28页 |
| 第三节 与含油量相关的酶DGAT及PEPC研究进展 | 第28-33页 |
| 第四节 植物油脂基因工程调控的方法 | 第33-39页 |
| 第二章 本研究的立题依据及技术路线 | 第39-42页 |
| 1.本研究的立题依据 | 第39-41页 |
| 2.总体思路与技术路线 | 第41-42页 |
| 第三章 拟南芥DGAT基因的克隆及表达载体的构建 | 第42-63页 |
| 1 材料和方法 | 第42-50页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·方法 | 第43-50页 |
| ·拟南芥DNA及RNA的提取 | 第43页 |
| ·拟南芥DGAT基因的扩增 | 第43-44页 |
| ·拟南芥DGAT基因的克隆及检测 | 第44-47页 |
| ·测序 | 第47页 |
| ·拟南芥DGAT基因表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·拟南芥DGAT基因表达载体转化根癌农杆菌 | 第48-50页 |
| 2.结果与分析 | 第50-60页 |
| ·拟南芥RNA和DNA的纯度和完整性检测 | 第50页 |
| ·拟南芥DGAT基因的PCR扩增及克隆 | 第50-51页 |
| ·拟南芥DGAT基因序列及基因结构 | 第51-53页 |
| ·拟南芥DGAT基因序列及编码的蛋白质特性 | 第53-55页 |
| ·拟南芥DGAT酶蛋白的同源性分析 | 第55-58页 |
| ·种子特异性DGAT基因表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·DGAT种子特异性表达载体的检测及方向鉴定 | 第59页 |
| ·根癌农杆菌的转化 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-63页 |
| ·关于拟南芥花柱RNA及DNA的提取 | 第60-61页 |
| ·关于DGAT的结构及功能 | 第61-63页 |
| 第四章 甘蓝型油菜PEPC基因片段的克隆和种子特异性反义表达载体的构建 | 第63-70页 |
| 1 材料与方法 | 第63-65页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·方法 | 第64-65页 |
| ·油菜DNA的提取 | 第64页 |
| ·PEPC基因的PCR扩增 | 第64页 |
| ·PEPC基因的克隆 | 第64页 |
| ·重组子的筛选鉴定 | 第64页 |
| ·测序 | 第64页 |
| ·反义PEPC植物表达载体的构建 | 第64页 |
| ·反义PEPC表达载体转化根癌农杆菌菌落PCR | 第64-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-69页 |
| ·甘蓝型油菜PEPC片段扩增 | 第65页 |
| ·重组克隆的PCR及酶切鉴定 | 第65页 |
| ·PEPC片段的序列分析测序结果 | 第65-67页 |
| ·种子特异性反义PEPC表达载体pBI121.NP构建 | 第67-68页 |
| ·种子特异性反义PEPC表达载体pBI121.NP构建的检测 | 第68页 |
| ·根癌农杆菌的转化 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-70页 |
| 第五章 油菜的遗传转化及转基因油菜的获得 | 第70-87页 |
| 1 材料和方法 | 第71-72页 |
| ·实验材料 | 第71-72页 |
| ·植物品种 | 第71页 |
| ·质粒与菌种 | 第71页 |
| ·酶与试剂 | 第71页 |
| ·培养基 | 第71-72页 |
| 2 实验方法 | 第72-76页 |
| ·外植体制备 | 第72页 |
| ·卡那霉素临界值的确定 | 第72页 |
| ·农杆菌的培养 | 第72页 |
| ·菌液浓度及浸染时间的确定 | 第72-73页 |
| ·共培养时间对转化的确定 | 第73页 |
| ·延迟筛选对遗传转化的影响 | 第73页 |
| ·抗性芽的梯度筛选 | 第73页 |
| ·转基因油菜的分子生物的检测 | 第73-76页 |
| 3 结果与分析 | 第76-83页 |
| ·卡那霉素临界值的确定 | 第76页 |
| ·苗龄及预培养对子叶节遗传转化的影响 | 第76-77页 |
| ·农杆菌菌液浓度及感染时间对转化的影响 | 第77-78页 |
| ·共培养时间对转化的影响 | 第78-79页 |
| ·延迟筛选对遗传转化的影响 | 第79页 |
| ·抗性芽的梯度筛选与植株再生 | 第79-80页 |
| ·稳定转化及抗性植株的获得 | 第80页 |
| ·抗卡那霉素转基因绿苗的获得 | 第80-81页 |
| ·转基因油菜的PCR分析 | 第81-82页 |
| ·转基因油菜PCR-Southern杂交检测 | 第82-83页 |
| 4.讨论 | 第83-87页 |
| ·关于甘蓝型油菜子叶节农杆菌介导法高效转化体系的建立 | 第83-85页 |
| ·关于多基因的遗传转化 | 第85-86页 |
| ·阳性植株PCR检测引物设计和PCR-Southern杂交探针选择 | 第86-87页 |
| 第六章 转PEPC及DGAT基因在油菜中的表达及对种子内油脂和蛋白质代谢的影响 | 第87-98页 |
| 1 材料与方法 | 第87-91页 |
| ·材料 | 第87-88页 |
| ·方法 | 第88-91页 |
| ·转基因油菜的半定量一步PCR分析 | 第88页 |
| ·Northern杂交 | 第88-90页 |
| ·PEP酶活性的测定 | 第90页 |
| ·种子内总蛋白的提取与含量测定 | 第90页 |
| ·含油量的测定 | 第90-91页 |
| 2.实验结果 | 第91-95页 |
| ·转DGAT基因植株中DGAT基因的转录水平 | 第91页 |
| ·转DGAT基因在油菜叶与种子的中的表达状况 | 第91-92页 |
| ·转反义PEP基因对PEP酶活性影响 | 第92-93页 |
| ·转基因植株种子中蛋白质和油脂的变化及关系 | 第93-94页 |
| ·转基因对植株的种子重量影响 | 第94-95页 |
| 3.讨论 | 第95-98页 |
| ·PEP的表达及对油菜种子中油脂蛋白质含量的影响 | 第95-96页 |
| ·DGAT基因的表达对油菜种子中油脂蛋白质含量的影响 | 第96-97页 |
| ·DGAT和PEP基因的共同表达对油菜种子中油脂蛋白质含量的影响 | 第97页 |
| ·关于本研究中转基因植物安全性问题的讨论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-109页 |
| 博士期间论文发表情况 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110页 |
