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球孢白僵菌原生质体遗传转化研究及其杀虫相关基因的分离

第一部分 文献综述第1-21页
   ·球孢白僵菌及其杀虫作用第8页
   ·昆虫病原真菌致病机理的研究进展第8-14页
     ·昆虫病原真菌感染寄主的基本过程第10页
     ·分生孢子的吸附和萌发第10页
     ·侵染结构的形成第10-11页
     ·穿透昆虫体壁第11-13页
     ·昆虫病原真菌在寄主血腔中生长第13-14页
   ·真菌原生质体研究进展第14-17页
     ·原生质体的分离技术第15-16页
     ·原生质体融合技术第16页
     ·原生质体的应用第16页
     ·原生质体的分离条件第16-17页
     ·细胞壁形成和原生质体再生第17页
   ·原生质体遗传转化研究第17-21页
     ·原生质体转化方法:PEG法,基因枪法,农杆菌介导法第18-19页
     ·原生质体转化载体及转化条件第19页
     ·筛选标记第19-21页
第二部分 引言第21-24页
   ·研究背景意义第21-23页
   ·研究技术路线图第23-24页
第三部分 球孢白僵菌菌丝体、分生孢子最适培养基的筛选第24-28页
   ·材料与方法第24-25页
     ·菌株第24页
     ·培养基第24页
     ·涂平板观察法第24页
     ·生长曲线法第24页
     ·抗生素筛选第24-25页
   ·结果与分析第25-27页
     ·涂平板观察法筛选结果第25页
     ·生长曲线法筛选结果与最适培养基分析第25-27页
   ·结论第27-28页
第四部分 球孢白僵菌菌丝体原生质体获得和再生恢复培养第28-35页
   ·材料与方法第28-30页
     ·球孢白僵菌菌株第28页
     ·主要培养基及试剂第28页
     ·原生质体获得方法第28页
     ·菌龄培养条件筛选第28-29页
     ·不同浓度巯基乙醇处理菌丝筛选第29页
     ·最适酶筛选第29页
     ·原生质体获得时最适渗透压稳定剂筛选第29页
     ·原生质体再生恢复时最适渗透压稳定剂筛选第29页
     ·最适再生培养基筛选第29-30页
   ·结果与分析第30-34页
     ·菌龄对原生质体产量的影响第30页
     ·巯基乙醇处理结果与分析第30-31页
     ·最适酶筛选结果与分析第31页
     ·原生质体获得时最适渗透压稳定剂筛选结果与分析第31-32页
     ·原生质体再生恢复时最适渗透压稳定剂筛选结果与分析第32-33页
     ·软硬琼脂培养基对原生质体再生恢复的筛选结果与分析第33-34页
     ·讨论第34-35页
第五部分 PEG介导原生质体转化抗除草剂bar基因第35-38页
   ·材料与方法第35-37页
     ·菌株第35页
     ·质粒DNA第35页
     ·主要试剂及PGR引物第35页
     ·主要培养基第35-36页
     ·球孢白僵菌培养及原生质体制备第36页
     ·PTF102培养及质粒提取第36页
     ·PEG介导转化第36-37页
     ·转化子PCR鉴定第37页
   ·结果第37页
   ·讨论第37-38页
第六部分 球孢白僵菌杀虫相关基因的克隆及初步分析第38-53页
   ·材料和方法第38-41页
     ·菌株第38页
     ·培养基第38页
     ·主要试剂及PCR引物第38-39页
     ·白僵菌DNA提取第39页
     ·PCR反应及片断回收第39页
     ·DH5α感受态的制备第39页
     ·DNA连接、转化第39-40页
     ·质粒提取第40页
     ·重组子PCR鉴定第40页
     ·重组子酶切鉴定第40页
     ·序列测定和序列分析第40-41页
   ·结果与分析第41-51页
     ·玉米螟虫生真菌球孢白僵菌几丁质酶基因的克隆及分析第41-43页
     ·玉米螟虫生真菌球孢白僵菌内切几丁质酶基因的克隆及分析第43-46页
     ·玉米螟虫生真菌球孢白僵菌体壁蛋白酶基因的克隆及分析第46-49页
     ·玉米螟虫生真菌亲环素蛋白基因BbCPLA酶基因的克隆及分析第49-51页
   ·讨论第51-53页
主要结论第53-54页
参考文献第54-59页
作者简介第59页
发表论文第59页

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