| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| ·柔红霉素和阿霉素简介 | 第10-12页 |
| ·柔红霉素和阿霉素的分子结构 | 第10-11页 |
| ·柔红霉素和阿霉素的作用机制 | 第11页 |
| ·柔红霉素和阿霉素的工业生产方法 | 第11-12页 |
| ·柔红霉素和阿霉素的生物合成 | 第12-16页 |
| ·柔红霉素和阿霉素的生物合成途径 | 第12-14页 |
| ·柔红霉素和阿霉素的生物合成基因及其分子生物学研究 | 第14-16页 |
| ·链霉菌基因的表达 | 第16-17页 |
| ·链霉菌基因克隆的载体系统 | 第16-17页 |
| ·链霉菌启动子 | 第17页 |
| ·链霉菌次生代谢的代谢工程及应用 | 第17-19页 |
| ·代谢工程手段增加次生代谢产物的产量 | 第18-19页 |
| ·代谢工程手段产生新的次生代谢产物 | 第19页 |
| ·本课题的立题意义和研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章 dnrV基因的克隆及表达 | 第21-52页 |
| ·实验材料 | 第21-27页 |
| ·菌种和质粒 | 第21-23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·主要溶液和缓冲液 | 第24-26页 |
| ·试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器和设备 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-34页 |
| ·菌种的培养和保藏 | 第27-28页 |
| ·链霉菌基因组DNA的提取 | 第28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌质粒转化(CaCl_2法) | 第29页 |
| ·大肠杆菌质粒分离 | 第29-30页 |
| ·DNA片段的回收 | 第30页 |
| ·DNA序列的测定 | 第30页 |
| ·基因序列和蛋白序列的比对 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第30-31页 |
| ·Western Blotting | 第31-32页 |
| ·链霉菌原生质体制备 | 第32页 |
| ·链霉菌质粒转化 | 第32-33页 |
| ·链霉菌质粒提取 | 第33页 |
| ·柔红霉素产生菌的发酵培养和产物分析 | 第33-34页 |
| ·实验结果 | 第34-49页 |
| ·不同柔红霉素产生菌基因组DNA的提取 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增dnrV基因 | 第35-37页 |
| ·dnrV基因的亚克隆和测序 | 第37-38页 |
| ·dnrV基因的序列同源性分析 | 第38页 |
| ·dnrV基因在大肠杆菌中的诱导表达及Western Blotting | 第38-42页 |
| ·dnrV和doxA基因在SIPI-1482中的共表达 | 第42-48页 |
| ·链霉菌表达质粒转化SIPI-1482原生质体及基因工程菌发酵实验 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第三章 dnrX基因的阻断突变 | 第52-74页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·菌种和质粒 | 第52页 |
| ·培养基 | 第52-53页 |
| ·主要溶液和缓冲液 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| ·主要仪器和设备 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-56页 |
| ·反向PCR(reverse PCR) | 第53-54页 |
| ·DNA片段末端去磷酸化 | 第54页 |
| ·DNA粘性末端的平滑化 | 第54-55页 |
| ·基因阻断用质粒DNA的预处理 | 第55页 |
| ·阻断突变株发酵和产物提取 | 第55-56页 |
| ·实验结果 | 第56-69页 |
| ·PCR扩增dnrX基因 | 第56-57页 |
| ·dnrX基因的亚克隆和测序 | 第57页 |
| ·dnrX基因的序列同源性分析 | 第57-58页 |
| ·反向PCR扩增dnrX基因完整序列 | 第58-59页 |
| ·dnrX破坏用质粒的构建及验证 | 第59-64页 |
| ·dnrX基因的阻断突变 | 第64页 |
| ·重组子的PCR验证 | 第64-65页 |
| ·重组子发酵 | 第65-68页 |
| ·重组子稳定性 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-72页 |
| ·小结 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-77页 |
| 综述报告和发表文章 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 附录 | 第79-86页 |
