| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-22页 |
| ·鱼类耐低温研究进展 | 第18页 |
| ·实时荧光定量PCR 实验方法及应用 | 第18-20页 |
| ·荧光定量 PCR 原理 | 第18-19页 |
| ·荧光定量 PCR 方法分类 | 第19页 |
| ·荧光定量 PCR 的应用 | 第19-20页 |
| ·RACE 技术进展 | 第20-21页 |
| ·转基因技术研究进展 | 第21-22页 |
| 第二章 鲤脑组织低温差异表达候选基因的筛选 | 第22-33页 |
| ·实验材料 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-25页 |
| ·RNA 提取及cDNA 模板的制备 | 第22-23页 |
| ·鲤耐低温EST 序列来源及引物设计 | 第23-24页 |
| ·引物的筛选 | 第24页 |
| ·质粒标准品的制备 | 第24页 |
| ·荧光定量 PCR 反应 | 第24页 |
| ·双标准曲线的制备及数据转换 | 第24-25页 |
| ·数据统计方法 | 第25页 |
| ·结果与分析 | 第25-29页 |
| ·RNA 提取质量及单链cDNA 合成结果 | 第25-26页 |
| ·特异性引物筛选结果 | 第26页 |
| ·质粒标准品质量检测及双标准曲线分析 | 第26-28页 |
| ·各基因相对定量结果 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-33页 |
| ·双标准曲线相对定量 PCR 法的应用 | 第29-30页 |
| ·表达量显著上升基因的功能分析 | 第30-31页 |
| ·表达量下降基因的功能分析 | 第31-33页 |
| 第三章 斑马鱼中候选基因表达量的验证 | 第33-38页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-34页 |
| ·序列来源及引物设计 | 第33页 |
| ·双标准曲线相对定量 PCR 法 | 第33-34页 |
| ·斑马鱼定量实验结果 | 第34-36页 |
| ·引物信息及筛选结果 | 第34-35页 |
| ·双标准曲线结果 | 第35页 |
| ·斑马鱼定量结果 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| ·双标准曲线定量 PCR 体系优化及实验技巧 | 第36-37页 |
| ·比较4 个基因在鲤鱼和斑马鱼的表达量差异 | 第37-38页 |
| 第四章 5 个基因全长cDNA 的克隆 | 第38-47页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-43页 |
| ·SMARTer RACE cDNA 扩增原理 | 第38-40页 |
| ·SMARTer RACE cDNA 扩增步骤 | 第40-43页 |
| ·实验结果 | 第43-45页 |
| ·5'-RACE PCR 及3'-RACE PCR 扩增结果 | 第43-44页 |
| ·5 个基因测序结果分析及cDNA 全长拼接 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| ·RACE 实验操作要领 | 第45-46页 |
| ·cDNA 全长的获得及其意义 | 第46-47页 |
| 第五章 生物信息学方法预测蛋白质结构及功能 | 第47-65页 |
| ·实验方法 | 第47-50页 |
| ·寻找开放阅读框(ORF) | 第47页 |
| ·基因同源性分析及结构分析 | 第47-48页 |
| ·蛋白质理化性质分析 | 第48页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第48页 |
| ·蛋白质结构域分析 | 第48-49页 |
| ·蛋白质三级结构预测 | 第49-50页 |
| ·蛋白质序列比对及分子系统发生分析 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-62页 |
| ·ORF 位点及蛋白质序列 | 第50-52页 |
| ·各目的基因全长cDNA 同源比对 | 第52页 |
| ·U5 基因组转录调控序列分析 | 第52-53页 |
| ·蛋白质理化性质分析结果 | 第53-55页 |
| ·蛋白质二级结构预测结果 | 第55-57页 |
| ·蛋白质结构域预测结果 | 第57-59页 |
| ·蛋白质三级结构预测结果 | 第59-60页 |
| ·蛋白质分子进化树建立 | 第60-62页 |
| ·讨论 | 第62-65页 |
| ·同源建模法预测蛋白质三维结构 | 第62页 |
| ·蛋白质结构与功能 | 第62-63页 |
| ·进化树与蛋白质功能 | 第63页 |
| ·鲤鱼耐低温机制预测 | 第63-65页 |
| 第六章 转脱氢酶基因 Tol2 载体的构建 | 第65-71页 |
| ·Tol2 转座子结构特征及工作原理 | 第65-66页 |
| ·实验材料 | 第66-67页 |
| ·转基因Tol2 载体构建步骤 | 第67-69页 |
| ·结果 | 第69-70页 |
| ·引物设计结果及 PCR 扩增结果 | 第69页 |
| ·转基因 Tol2 载体构建结果 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读硕士期间发表学术论文 | 第82页 |