| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-14页 |
| 引言 | 第14-18页 |
| 参考文献 | 第15-18页 |
| 缩略词表 | 第18-20页 |
| 第一章 单胚mRNA差异法筛选牛早期胚胎发育差异表达基因 | 第20-38页 |
| 1 材料 | 第21页 |
| ·试剂及耗材 | 第21页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-29页 |
| ·单胚mRNA差异显示方法筛选牛早期胚胎发育相关基因 | 第21-26页 |
| ·差异片段的鉴定 | 第26-29页 |
| 3 结果 | 第29-34页 |
| ·差异片段的获得 | 第29-31页 |
| ·LYAR、RPL31基因mRNA相对表达差异的检测 | 第31-34页 |
| ·牛8细胞胚胎和囊胚中LYAR及RPL31蛋白的相对表达量 | 第34页 |
| 4 讨论 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-38页 |
| 第二章 差显基因真核过表达载体和干扰载体的构建 | 第38-52页 |
| 1 材料 | 第39页 |
| ·试剂及耗材 | 第39页 |
| ·仪器设备 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-43页 |
| ·牛差显基因克隆以及过表达克隆载体的构建 | 第39-41页 |
| ·过表达载体pIRES2-EGFP-LYAR/RPL31的构建 | 第41页 |
| ·干扰载体pGCsi-LYAR/RPL31的构建 | 第41-43页 |
| ·质粒载体的提取 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-47页 |
| ·牛Total RNA的制备及LYAR、RPL31基因的克隆 | 第43-44页 |
| ·牛差显基因LYAR、RPL31的测序 | 第44-46页 |
| ·过表达载体pIRES2-EGFP-LYAR/RPL31的鉴定 | 第46页 |
| ·大提质粒的检测 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 第三章 差异表达基因转基因细胞系的建立 | 第52-70页 |
| 1 材料 | 第52-54页 |
| ·主要仪器设备 | 第52-53页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·试剂及耗材 | 第53页 |
| ·溶液配方 | 第53-54页 |
| 2 方法 | 第54-58页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的分离和培养 | 第54-56页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的外源基因转染 | 第56-58页 |
| 3 结果 | 第58-64页 |
| ·组织块贴附法分离培养牛胎儿成纤维细胞 | 第58-59页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞生长曲线的测定 | 第59-60页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的染色体数目分析 | 第60-61页 |
| ·G418对牛胎儿成纤维细胞的毒性检测 | 第61页 |
| ·转基因细胞的制备 | 第61-63页 |
| ·转基因细胞的鉴定 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 第四章 牛胚胎差异表达基因功能的研究 | 第70-88页 |
| 1 材料 | 第71-72页 |
| ·仪器设备 | 第71页 |
| ·试剂与耗材 | 第71页 |
| ·溶液配方 | 第71-72页 |
| 2 方法 | 第72-76页 |
| ·LYAR/RPL31对细胞生长的影响 | 第72页 |
| ·LYAR/RPL31对牛早期胚胎发育的影响 | 第72-76页 |
| ·卵巢卵母细胞的采集和体外成熟 | 第72-73页 |
| ·牛孤雌胚胎的培养 | 第73页 |
| ·转基因核移植重构胚的制备 | 第73-74页 |
| ·转基因克隆囊胚PI和Hoechest33342的染色 | 第74页 |
| ·转基因克隆囊胚的多重基因表达分析 | 第74-76页 |
| ·统计分析 | 第76页 |
| 3 结果 | 第76-82页 |
| ·转基因细胞生长曲线的绘制 | 第76-77页 |
| ·LYAR/RPL31对细胞周期的影响 | 第77-78页 |
| ·卵巢卵母细胞的采集和体外成熟 | 第78页 |
| ·牛孤雌胚胎的培养 | 第78页 |
| ·转基因重构胚的融合与体外发育培养 | 第78-79页 |
| ·转基因克隆囊胚PI和Hoechest33342的染色 | 第79-81页 |
| ·转基因克隆囊胚多重基因表达分析 | 第81-82页 |
| 4 讨论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-88页 |
| 结论 | 第88-90页 |
| 文献综述部分 | 第90-108页 |
| 参考文献 | 第101-108页 |
| 致谢 | 第108-110页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第110页 |
