| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 英文缩略表 | 第15-17页 |
| 1 引言 | 第17-40页 |
| ·植物的耐盐性 | 第17-33页 |
| ·盐胁迫对植物的危害 | 第17-18页 |
| ·Na+毒性的主要基础 | 第18-19页 |
| ·植物的盐胁迫适应机制 | 第19-29页 |
| ·解毒作用 | 第20-21页 |
| ·维持体内离子和渗透平衡 | 第21-29页 |
| ·生长调节 | 第29页 |
| ·盐胁迫信号途径 | 第29-33页 |
| ·Ca2+偶联的CDPK信号途 | 第30页 |
| ·Ca2+偶联的SOS信号途径 | 第30-32页 |
| ·MAPK磷酸化蛋白传递途径 | 第32-33页 |
| ·棉花的耐盐性 | 第33-39页 |
| ·棉花的耐盐机制 | 第34-36页 |
| ·离子运输 | 第34-35页 |
| ·抗氧化反应 | 第35-36页 |
| ·棉花耐盐性育种进展 | 第36-39页 |
| ·棉花耐盐性的遗传基础 | 第36-37页 |
| ·提高棉花耐盐性的途径 | 第37-39页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第39-40页 |
| 2 材料与方法 | 第40-59页 |
| ·材料 | 第40-42页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·植物材料培养与处理 | 第40页 |
| ·酵母菌株和载体 | 第40页 |
| ·原核表达载体和菌株 | 第40页 |
| ·实验引物 | 第40-41页 |
| ·其他材料 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-59页 |
| ·RNA提取 | 第42-43页 |
| ·RNA纯化 | 第43页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第43页 |
| ·cDNA全长序列的获得 | 第43-45页 |
| ·兼并引物F)CR获得GhNHXl中间片段 | 第43-44页 |
| ·5’RACE获得5’端序列 | 第44页 |
| ·3’RACE法获得3’端序列 | 第44-45页 |
| ·cDNA全长序列的获得 | 第45页 |
| ·DNA片段与克隆载体的连接 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第46页 |
| ·大肠杆菌细胞的转化 | 第46页 |
| ·序列测定 | 第46-47页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第47-48页 |
| ·电泳凝胶中DNA片段的回收 | 第48页 |
| ·Northern杂交 | 第48-49页 |
| ·RNA提取及电泳 | 第48页 |
| ·转膜及烘膜 | 第48-49页 |
| ·探针合成 | 第49页 |
| ·预杂交及杂交 | 第49页 |
| ·Southern杂交 | 第49-51页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第50页 |
| ·限制性内切酶消化 | 第50页 |
| ·转膜 | 第50页 |
| ·探针合成 | 第50-51页 |
| ·预杂交及杂交 | 第51页 |
| ·酵母表达载体的构建与转化 | 第51-52页 |
| ·试剂配制 | 第51-52页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第52页 |
| ·酵母感受态细胞的制备和乙酸锂转化法转化 | 第52页 |
| ·酵母菌的培养 | 第52页 |
| ·植物表达载体的构建与转化 | 第52-55页 |
| ·植物正义表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备及转化 | 第53-54页 |
| ·农杆菌的培养 | 第54页 |
| ·农杆菌介导的烟草的转化 | 第54页 |
| ·植物反义表达载体的构建 | 第54-55页 |
| ·棉花转化 | 第55页 |
| ·原核表达及抗体制备 | 第55-57页 |
| ·实验试剂配制 | 第55页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第55页 |
| ·E.coli BL2l原核表达的诱导 | 第55-56页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS～PAGE) | 第56页 |
| ·抗体的制备 | 第56-57页 |
| ·抗血清效价的测定(试管微量沉淀法) | 第57页 |
| ·生理指标的测定 | 第57-59页 |
| ·叶绿素含量的测定 | 第57页 |
| ·丙二醛含量的测定 | 第57-58页 |
| ·相对干重的测定 | 第58页 |
| ·Na+、K+、C1-、Ca2+、Mn2+离子含量的测定 | 第58-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-78页 |
| ·棉花液泡型逆向运转体基因的分离、表达分析及功能鉴定5l | 第59-73页 |
| ·棉花液泡型逆向运转体基因的分离 | 第59-60页 |
| ·GhNHXl中间片段的分离5l | 第59页 |
| ·GhNf{X1 5’片段的分离 | 第59页 |
| ·GhNtHx1 3’片段的分离5l | 第59页 |
| ·GhNHxl全长cDNA的分离: | 第59-60页 |
| ·GhNHXl的序列分析 | 第60-66页 |
| ·棉花液泡型逆向运转体基因的表达分析 | 第66-67页 |
| ·棉花GhNHXl基因的功能鉴定 | 第67-73页 |
| ·棉花GhNHX1基因在酵母突变体中的表达 | 第67-69页 |
| ·棉花GhNHx1基因在烟草中超表达及转基因烟草的耐盐性分析 | 第69-70页 |
| ·棉花GhNtHx1基因在棉花中超表达、反义抑制及转基因棉花的筛选 | 第70-73页 |
| ·棉花不同棉花品种的耐盐性分析 | 第73-75页 |
| ·盐胁迫对不同棉花品种的叶绿素(Chl)和丙二醛(MDA)含量的影响 | 第73页 |
| ·盐胁迫处理后不同棉花品种的离子含量的差异 | 第73-74页 |
| ·GhNHXl在不同棉花品种中的诱导表达 | 第74-75页 |
| ·GhaNHXl的原核诱导表达和抗体制备 | 第75-78页 |
| 4 讨论 | 第78-84页 |
| ·GHNHXl编码一种液泡型Na+/H+逆向运转体 | 第78-80页 |
| ·GHNHXl可能的信号机制 | 第80-81页 |
| ·棉花不同品种的耐盐性差异与GhNHXl的关系 | 第81-82页 |
| ·融合蛋白的原核表达和培养条件对表达产量的提高 | 第82-84页 |
| 5 结论 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-103页 |
| 附录 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
