| 中文摘要 | 第1-15页 |
| 英文摘要 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-42页 |
| ·碱性成纤维细胞生长因子 | 第17-25页 |
| ·成纤维细胞生长因子简介 | 第17-18页 |
| ·碱性成纤维细胞因子研究历史 | 第18页 |
| ·碱性成纤维细胞因子的生物学特性 | 第18-21页 |
| ·碱性成纤维细胞因子的细胞学效应 | 第21页 |
| ·碱性成纤维细胞因子的生物学功能 | 第21-23页 |
| ·碱性成纤维细胞因子基因的克隆和表达 | 第23-24页 |
| ·碱性成纤维细胞因子纯化 | 第24-25页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的高效表达 | 第25-33页 |
| ·质粒拷贝数和质粒稳定性 | 第25-26页 |
| ·启动子与外源基因表达 | 第26-28页 |
| ·上游调控元件对外源基因表达的影响 | 第28页 |
| ·mRNA的稳定性对外源基因表达的影响 | 第28-29页 |
| ·翻译体系与外源基因表达 | 第29-30页 |
| ·外源蛋白在细胞质中的折叠 | 第30-31页 |
| ·外源蛋白的在大肠杆菌细胞质降解 | 第31-32页 |
| ·外源蛋白的融合型表达 | 第32页 |
| ·外源蛋白的分泌型表达 | 第32-33页 |
| ·外源蛋白在周质中折叠和降解 | 第33页 |
| ·宿主菌的培养控制 | 第33页 |
| ·重组大肠杆菌的高密度培养 | 第33-40页 |
| ·限制大肠杆菌高密度培养的主要因素 | 第34-35页 |
| ·高密度培养的途径 | 第35-37页 |
| ·高密度培养同时高表达的研究 | 第37-40页 |
| ·重组大肠杆菌高密度发酵技术的发展与展望 | 第40页 |
| ·本研究的目的与研究内容 | 第40-42页 |
| ·本研究的的意义 | 第40-41页 |
| ·主要研究内容 | 第41-42页 |
| 第二章 材料与方法 | 第42-60页 |
| ·实验材料 | 第42-49页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·主要化学试剂 | 第42-43页 |
| ·实验菌株 | 第43页 |
| ·DNA材料 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43-44页 |
| ·实验试剂 | 第44-49页 |
| ·实验方法 | 第49-59页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的大量制备 | 第49-50页 |
| ·碱法小提质粒 | 第50页 |
| ·琼脂糖电泳 | 第50页 |
| ·DNA的酶切 | 第50-51页 |
| ·DNA的纯化 | 第51页 |
| ·DNA的体外连接 | 第51页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第51-52页 |
| ·转化 | 第52页 |
| ·转化子的快速鉴定 | 第52-53页 |
| ·hbFGF高效表达工程菌的构建 | 第53页 |
| ·表达产物的SDS—PAGE的电泳分析 | 第53-54页 |
| ·表达产物的免疫学测定 | 第54-56页 |
| ·表达产物的生物学活性测定 | 第56页 |
| ·重组质粒的稳定性测定 | 第56-57页 |
| ·葡萄糖的测定 | 第57页 |
| ·蛋白质的测定 | 第57-58页 |
| ·hbFGF的间接定量的测定 | 第58-59页 |
| ·比生长速率计算 | 第59-60页 |
| 第三章 高效表达hbFGF重组大肠杆菌的构建 | 第60-72页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·载体质粒pET-3c的提取与酶切 | 第60-61页 |
| ·T7启动子与pET-3c表达质粒 | 第60-61页 |
| ·pET-3c质粒的扩增和BamHI+NdeI酶切 | 第61页 |
| ·PCR引物的设计 | 第61-62页 |
| ·hbFGF基因的PCR扩增与纯化 | 第62-63页 |
| ·hbFGF的基因PER扩增 | 第62-63页 |
| ·PCR产物的纯化与酶切 | 第63页 |
| ·表达载体构建 | 第63-64页 |
| ·DNA片段的体外连接与转化 | 第63页 |
| ·转化子的快速鉴定 | 第63-64页 |
| ·pET-3c／rhbFGF序列测定 | 第64页 |
| ·重组高效表达rhbFGF大肠杆菌的构建 | 第64-66页 |
| ·转化与高表达菌株筛选 | 第64-65页 |
| ·表达产物的免疫检测 | 第65-66页 |
| ·表达蛋白的活性检测 | 第66页 |
| ·表达产物氨基酸序列的测定 | 第66页 |
| ·重组质粒不稳定性研究 | 第66-69页 |
| ·重组质粒分离不稳定性 | 第67页 |
| ·重组质粒结构不稳定性 | 第67-69页 |
| 本章小结 | 第69-72页 |
| 第四章 重组大肠杆菌JB-2菌株培养特性 | 第72-85页 |
| ·引言 | 第72页 |
| ·重组大肠杆菌JB—2菌株的生长曲线 | 第72页 |
| ·吸光值OD_(600)与菌体干重的关系 | 第72-73页 |
| ·物理因子对菌体生长的影响 | 第73-75页 |
| ·pH值对菌体生长的影响 | 第73-74页 |
| ·摇瓶装液量对菌体生长的影响 | 第74页 |
| ·温度对菌体生长的影响 | 第74-75页 |
| ·化学因子对菌体生长的影响 | 第75-77页 |
| ·乙酸对菌体生长的影响 | 第75-76页 |
| ·IPTG对菌体生长的影响 | 第76-77页 |
| ·培养基对菌生长的影响 | 第77-83页 |
| ·几种补料物对菌体生长的比较 | 第78-79页 |
| ·葡萄糖对菌体生长的影响 | 第79-81页 |
| ·无机物营养物对菌体生长的影响 | 第81-82页 |
| ·酵母膏与蛋白胨比例对菌体生长的影响 | 第82-83页 |
| 本章小结 | 第83-85页 |
| 第五章 培养条件与hbFGF表达 | 第85-93页 |
| ·引言 | 第85页 |
| ·诱导剂与hbFGF表达 | 第85-86页 |
| ·诱导添加时间与hhbFGF表达 | 第85页 |
| ·诱导剂添加量与hbFGF表达 | 第85-86页 |
| ·培养条件与hbFGF的表达 | 第86-89页 |
| ·摇瓶装液量对hbFGF表达的影响 | 第86-87页 |
| ·pH值与hbFGF的表达 | 第87-88页 |
| ·接种量对hbFGF表达量的影响 | 第88页 |
| ·乙酸对hbFGF表达的影响 | 第88-89页 |
| ·培养基组成对hbFGF表达的影响 | 第89-92页 |
| ·不同酵母膏／蛋白胨比例与hbFGF表达量 | 第89-90页 |
| ·添加物对hbFGF表达的影响 | 第90-92页 |
| 本章小结 | 第92-93页 |
| 第六章 培养基优化与发酵工艺研究 | 第93-98页 |
| ·引言 | 第93页 |
| ·培养基优化 | 第93-94页 |
| ·培养参数的确定 | 第94-97页 |
| ·IPTG的添加时间和添加量 | 第95-96页 |
| ·诱导表达时间与hbFGF表达 | 第96-97页 |
| 本章小结 | 第97-98页 |
| 第七章 生物反应器培养 | 第98-105页 |
| ·引言 | 第98页 |
| ·JB-2发酵培养中菌体生长曲线 | 第98-99页 |
| ·葡萄糖流加方式与bFGF表达 | 第99-100页 |
| ·间歇流加葡萄糖模式 | 第99页 |
| ·连续流加葡萄糖模式 | 第99-100页 |
| ·5L生物反应器培养 | 第100-104页 |
| ·通空气5L生物反应器培养 | 第100-102页 |
| ·通纯氧5L生物反应器培养 | 第102-104页 |
| 本章小结 | 第104-105页 |
| 结论与展望 | 第105-108页 |
| 参考文献 | 第108-118页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 附录 | 第120-125页 |