| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-25页 |
| 1 猪流感概述 | 第11-17页 |
| ·猪流感的历史与世界流行情况 | 第11-12页 |
| ·病毒形态结构与编码的蛋白 | 第12-17页 |
| ·病毒的形态结构 | 第12页 |
| ·病毒的编码蛋白 | 第12-16页 |
| ·病毒的变异 | 第16-17页 |
| 2 猪流感诊断技术 | 第17-22页 |
| ·流感病毒的分离和鉴定 | 第17页 |
| ·猪流感的血清学诊断方法 | 第17-20页 |
| ·猪流感的分子生物学诊断方法 | 第20-22页 |
| 3 猪流感的公共卫生意义 | 第22-23页 |
| ·猪流感的兽医公共卫生意义 | 第22页 |
| ·猪流感的人类公共卫生意义 | 第22-23页 |
| 4 小结 | 第23-25页 |
| 第二部分 研究内容 | 第25-57页 |
| 第一章 抗猪流感病毒血清的制备 | 第25-31页 |
| 1 材料 | 第25页 |
| ·毒株 | 第25页 |
| ·实验动物 | 第25页 |
| ·生化试剂 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-28页 |
| ·病毒培养 | 第25-26页 |
| ·血凝试验 | 第26页 |
| ·免疫抗原的制备 | 第26页 |
| ·动物免疫 | 第26-27页 |
| ·抗体检测 | 第27-28页 |
| ·血清采集 | 第27页 |
| ·RDE处理血清 | 第27页 |
| ·HI试验 | 第27-28页 |
| ·抗猪流感病毒血清的收集 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-29页 |
| ·猪流感免疫抗原 | 第28页 |
| ·免疫猪抗体水平监测 | 第28-29页 |
| ·抗猪流感病毒阳性血清 | 第29页 |
| 4 讨论 | 第29-31页 |
| 第二章 不同亚型猪流感病毒血凝素蛋白表达与纯化 | 第31-46页 |
| 1 材料与方法 | 第31-38页 |
| ·病毒 | 第31页 |
| ·菌株及质粒 | 第31页 |
| ·酶与生化试剂 | 第31-32页 |
| ·常用缓冲液 | 第32页 |
| ·RT-PCR引物设计 | 第32页 |
| ·病毒总RNA的抽提 | 第32页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第32-33页 |
| ·HA1基因的PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·HA1基因原核表达构建 | 第34-36页 |
| ·融合蛋白的表达和检测 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| 2 结果 | 第38-44页 |
| ·HA1基因的扩增 | 第38页 |
| ·重组质粒的构建 | 第38-40页 |
| ·HA1蛋白的诱导表达与鉴定 | 第40-43页 |
| ·重组表达产物的SDS-PAGE分析 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白的Western blot鉴定 | 第41-42页 |
| ·表达条件优化 | 第42-43页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| 3 讨论与小结 | 第44-46页 |
| 第三章 检测猪H5亚型猪流感抗体的间接ELISA方法建立 | 第46-57页 |
| 1 材料与方法 | 第46-49页 |
| ·血清 | 第46页 |
| ·ELISA抗原 | 第46页 |
| ·其它试剂与仪器 | 第46页 |
| ·常用缓冲液 | 第46页 |
| ·ELISA的操作基本程序 | 第46-47页 |
| ·间接ELISA最佳反应条件的建立 | 第47-48页 |
| ·抗原包被浓度和血清最佳稀释倍数的确定 | 第47页 |
| ·包被液的选择 | 第47页 |
| ·封闭液的选择 | 第47页 |
| ·稀释液的选择 | 第47页 |
| ·血清最佳反应时间的确定 | 第47-48页 |
| ·酶标抗体反应时间的确定 | 第48页 |
| ·TMB底物反应时间的确定 | 第48页 |
| ·间接ELISA判定标准的确定 | 第48页 |
| ·交叉反应 | 第48页 |
| ·同批抗原包被板内重复性试验 | 第48页 |
| ·不同批次抗原包被板间重复性试验 | 第48-49页 |
| ·血清样品检测 | 第49页 |
| ·免疫猪抗体水平检测 | 第49页 |
| ·HI试验 | 第49页 |
| ·全病毒-ELISA | 第49页 |
| ·HA1-EL15A | 第49页 |
| 2 结果 | 第49-55页 |
| ·间接ELISA最佳反应条件的建立 | 第49-53页 |
| ·抗原包被浓度和血清最佳稀释倍数的确定 | 第49-51页 |
| ·包被液的选择 | 第51页 |
| ·封闭液的选择 | 第51页 |
| ·稀释液的选择 | 第51页 |
| ·血清最佳反应时间的确定 | 第51-52页 |
| ·酶标抗体反应时间的确定 | 第52页 |
| ·TMB底物反应时间的确定 | 第52-53页 |
| ·间接ELISA判定标准的确定 | 第53页 |
| ·间接ELISA特异性 | 第53页 |
| ·间接ELISA稳定性和重复性试验 | 第53-54页 |
| ·同批抗原包被板内重复性试验 | 第53页 |
| ·不同批次抗原包被板间重复性试验 | 第53-54页 |
| ·送检猪血清的检测 | 第54-55页 |
| ·猪流感免疫猪抗体水平变化规律 | 第55页 |
| 3 小结与讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献(REFERENCES) | 第57-62页 |
| 常用缓冲液及培养基配方 | 第62-70页 |
| 英文缩略词表 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 个人简历 | 第72页 |