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杉木木材形成过程中差异表达基因的鉴定与功能分析

致谢第1-4页
摘要第4-6页
Abstract第6-13页
第一章 木材形成的遗传控制第13-40页
 1 前言第13-14页
 2 木材的结构与组成第14-15页
 3 木材形成的生物学过程第15-20页
   ·维管形成层的起源和结构第16-17页
   ·形成层原始细胞与干细胞第17-18页
   ·细胞扩展第18页
   ·次生壁的沉积第18-19页
   ·木质化过程第19页
   ·细胞程序性死亡第19-20页
   ·心材的形成第20页
 4 木材形成的研究方法第20-23页
   ·mRNA 差异显示技术(DDRT-PCR)第20页
   ·cDNA 代表性差异分析(RDA)第20-21页
   ·抑制差减杂交技术(SSH)第21-22页
   ·cDNA-AFLP第22页
   ·蛋白质组学第22-23页
 5 木材形成的研究系统第23-25页
   ·拟南芥(Arabidopsis)系统第23-24页
   ·百日草(Zinnia)叶肉细胞转分化成管状分子系统第24页
   ·杨树(Populus)系统第24-25页
   ·松树(Pinus)和桉树(Eucalyptus)系统第25页
 6 木材形成的遗传调控机制第25-29页
   ·调控木材形成的转录因子第26-27页
   ·木质素生物合成的转录调控第27-28页
   ·次生壁生物合成的转录调控网络第28-29页
   ·糖基转移酶(GTs,glycosyltransferases)第29页
 7 展望第29-30页
 参考文献第30-40页
第二章 突变体独干杉表型分析第40-47页
 1 前言第40-41页
 2 材料与方法第41-43页
   ·材料第41页
   ·水分含量测定第41-42页
   ·纤维素含量测定(Updegraff 1969)第42页
   ·木质素含量测定(Kirk and Obst 1988)第42-43页
   ·纤维素和木质素的组织定位第43页
 3 结果第43-45页
   ·独干杉细胞壁成分发生改变第43页
   ·木质素和纤维素的组织化学染色第43-45页
 4 讨论第45页
   ·木质素第45页
   ·木质纤维素第45页
 参考文献第45-47页
第三章 杉木木材形成过程差异表达基因文库的构建与分析第47-65页
 1 前言第47页
 2 材料与方法第47-59页
   ·材料第47-48页
   ·RNA Pull 的制备第48-50页
   ·抑制差减杂交第50-55页
   ·差减文库的构建第55-57页
   ·差减文库的鉴定第57-59页
 3 结果第59-62页
   ·总RNA 的分离第59页
   ·mRNA 的纯化第59-61页
   ·RsaⅠ酶切结果第61页
   ·第2 次PCR 扩增结果第61页
   ·差减效率检测第61-62页
   ·文库重组子鉴定第62页
 4 讨论第62-63页
   ·抑制差减杂交(SSH,suppression subtractive hybridization)第62-63页
   ·木质化(xylogenesis)第63页
 参考文献第63-65页
第四章 杉木木材形成过程特异表达基因的鉴定与分析第65-90页
 1 前言第65-66页
 2 材料与方法第66-73页
   ·材料第66页
   ·试剂第66页
   ·差异克隆筛选(Differential Screening)第66-70页
   ·序列测定第70-72页
   ·序列分析第72页
   ·定量PCR 验证第72-73页
 3 结果第73-76页
   ·Probe 接头Rsa I 酶切第73页
   ·Probe 定量第73-74页
   ·筛选(Differential Screening)差减文库第74-75页
   ·差异表达克隆的测序分析第75页
   ·定量RT-PCR 验证第75-76页
 4 讨论第76-87页
   ·生长素(Auxin)可能在决定独干杉表型形成中起重要作用第76-78页
   ·独干杉的细胞壁扩展(expansion)相对迟缓(inertial)第78-86页
   ·细胞壁合成基因的差异调控第86-87页
 参考文献第87-90页
第五章 杉木木材形成相关扩展蛋白基因的克隆与表达分析第90-109页
 1 前言第90-91页
 2 材料与方法第91-100页
   ·材料第91页
   ·总RNA、DNA 的分离第91-92页
   ·引物的设计与合成第92-93页
   ·目的基因全长cDNA 的分离第93-99页
   ·目的基因基因组全序列的鉴定第99-100页
   ·目的基因基因结构的分析第100页
   ·目的基因的表达模式第100页
 3 结果第100-103页
   ·扩展蛋白基因全长cDNA 的克隆第100-101页
   ·扩展蛋白基因的结构分析第101页
   ·扩展蛋白基因的序列分析第101-103页
   ·α-expansin 基因的系统进化树第103页
   ·表达分析第103页
 4 讨论第103-107页
   ·RACE 技术第103-106页
   ·Expansins(扩展蛋白)第106-107页
 参考文献第107-109页
第六章 木材形成相关扩展蛋白ClEXP1 和ClEXP2 基因的功能分析第109-132页
 1 前言第109-111页
 2 材料与方法第111-119页
   ·材料第111-112页
   ·目的基因全长cDNA 的克隆第112-113页
   ·过量表达载体的构建第113-114页
   ·农杆菌EHA105 介导的烟草转化第114-115页
   ·转基因植株的检测第115-116页
   ·转基因植株的分析第116-119页
 3 结果第119-125页
   ·目的基因ClEXP1、ClEXP2 的菌液PCR 鉴定第119页
   ·目的基因ClEXP1、ClEXP2 酶切回收第119页
   ·表达载体pCAMBIA 1301 的双酶切第119-120页
   ·p1301-ClEXP1 和p1301-ClEXP2 的鉴定第120页
   ·过量表达ClEXP1、ClEXP2 的转基因烟草呈现多效的(pleiotropic)表型.第120-123页
   ·转基因植株内源相关基因的表达分析第123页
   ·转基因植株纤维素含量变化第123-125页
   ·转基因植株髓薄壁细胞变化第125页
 4 讨论第125-128页
   ·杉木expansins 高度冗余且不是唯一细胞壁松弛因子第125页
   ·过量表达杉木expansins 的转基因烟草呈现多效的(pleiotropic)表型第125-127页
   ·过量表达杉木expansins 影响转基因烟草的细胞形态和组成第127页
   ·Expansins 在木质细胞生长中的作用第127-128页
 参考文献第128-132页
第七章 总结第132-135页
 1 主要结论第132-134页
 2 存在的问题第134页
 3 今后的研究方向第134-135页

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