致谢 | 第1-4页 |
摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-13页 |
第一章 木材形成的遗传控制 | 第13-40页 |
1 前言 | 第13-14页 |
2 木材的结构与组成 | 第14-15页 |
3 木材形成的生物学过程 | 第15-20页 |
·维管形成层的起源和结构 | 第16-17页 |
·形成层原始细胞与干细胞 | 第17-18页 |
·细胞扩展 | 第18页 |
·次生壁的沉积 | 第18-19页 |
·木质化过程 | 第19页 |
·细胞程序性死亡 | 第19-20页 |
·心材的形成 | 第20页 |
4 木材形成的研究方法 | 第20-23页 |
·mRNA 差异显示技术(DDRT-PCR) | 第20页 |
·cDNA 代表性差异分析(RDA) | 第20-21页 |
·抑制差减杂交技术(SSH) | 第21-22页 |
·cDNA-AFLP | 第22页 |
·蛋白质组学 | 第22-23页 |
5 木材形成的研究系统 | 第23-25页 |
·拟南芥(Arabidopsis)系统 | 第23-24页 |
·百日草(Zinnia)叶肉细胞转分化成管状分子系统 | 第24页 |
·杨树(Populus)系统 | 第24-25页 |
·松树(Pinus)和桉树(Eucalyptus)系统 | 第25页 |
6 木材形成的遗传调控机制 | 第25-29页 |
·调控木材形成的转录因子 | 第26-27页 |
·木质素生物合成的转录调控 | 第27-28页 |
·次生壁生物合成的转录调控网络 | 第28-29页 |
·糖基转移酶(GTs,glycosyltransferases) | 第29页 |
7 展望 | 第29-30页 |
参考文献 | 第30-40页 |
第二章 突变体独干杉表型分析 | 第40-47页 |
1 前言 | 第40-41页 |
2 材料与方法 | 第41-43页 |
·材料 | 第41页 |
·水分含量测定 | 第41-42页 |
·纤维素含量测定(Updegraff 1969) | 第42页 |
·木质素含量测定(Kirk and Obst 1988) | 第42-43页 |
·纤维素和木质素的组织定位 | 第43页 |
3 结果 | 第43-45页 |
·独干杉细胞壁成分发生改变 | 第43页 |
·木质素和纤维素的组织化学染色 | 第43-45页 |
4 讨论 | 第45页 |
·木质素 | 第45页 |
·木质纤维素 | 第45页 |
参考文献 | 第45-47页 |
第三章 杉木木材形成过程差异表达基因文库的构建与分析 | 第47-65页 |
1 前言 | 第47页 |
2 材料与方法 | 第47-59页 |
·材料 | 第47-48页 |
·RNA Pull 的制备 | 第48-50页 |
·抑制差减杂交 | 第50-55页 |
·差减文库的构建 | 第55-57页 |
·差减文库的鉴定 | 第57-59页 |
3 结果 | 第59-62页 |
·总RNA 的分离 | 第59页 |
·mRNA 的纯化 | 第59-61页 |
·RsaⅠ酶切结果 | 第61页 |
·第2 次PCR 扩增结果 | 第61页 |
·差减效率检测 | 第61-62页 |
·文库重组子鉴定 | 第62页 |
4 讨论 | 第62-63页 |
·抑制差减杂交(SSH,suppression subtractive hybridization) | 第62-63页 |
·木质化(xylogenesis) | 第63页 |
参考文献 | 第63-65页 |
第四章 杉木木材形成过程特异表达基因的鉴定与分析 | 第65-90页 |
1 前言 | 第65-66页 |
2 材料与方法 | 第66-73页 |
·材料 | 第66页 |
·试剂 | 第66页 |
·差异克隆筛选(Differential Screening) | 第66-70页 |
·序列测定 | 第70-72页 |
·序列分析 | 第72页 |
·定量PCR 验证 | 第72-73页 |
3 结果 | 第73-76页 |
·Probe 接头Rsa I 酶切 | 第73页 |
·Probe 定量 | 第73-74页 |
·筛选(Differential Screening)差减文库 | 第74-75页 |
·差异表达克隆的测序分析 | 第75页 |
·定量RT-PCR 验证 | 第75-76页 |
4 讨论 | 第76-87页 |
·生长素(Auxin)可能在决定独干杉表型形成中起重要作用 | 第76-78页 |
·独干杉的细胞壁扩展(expansion)相对迟缓(inertial) | 第78-86页 |
·细胞壁合成基因的差异调控 | 第86-87页 |
参考文献 | 第87-90页 |
第五章 杉木木材形成相关扩展蛋白基因的克隆与表达分析 | 第90-109页 |
1 前言 | 第90-91页 |
2 材料与方法 | 第91-100页 |
·材料 | 第91页 |
·总RNA、DNA 的分离 | 第91-92页 |
·引物的设计与合成 | 第92-93页 |
·目的基因全长cDNA 的分离 | 第93-99页 |
·目的基因基因组全序列的鉴定 | 第99-100页 |
·目的基因基因结构的分析 | 第100页 |
·目的基因的表达模式 | 第100页 |
3 结果 | 第100-103页 |
·扩展蛋白基因全长cDNA 的克隆 | 第100-101页 |
·扩展蛋白基因的结构分析 | 第101页 |
·扩展蛋白基因的序列分析 | 第101-103页 |
·α-expansin 基因的系统进化树 | 第103页 |
·表达分析 | 第103页 |
4 讨论 | 第103-107页 |
·RACE 技术 | 第103-106页 |
·Expansins(扩展蛋白) | 第106-107页 |
参考文献 | 第107-109页 |
第六章 木材形成相关扩展蛋白ClEXP1 和ClEXP2 基因的功能分析 | 第109-132页 |
1 前言 | 第109-111页 |
2 材料与方法 | 第111-119页 |
·材料 | 第111-112页 |
·目的基因全长cDNA 的克隆 | 第112-113页 |
·过量表达载体的构建 | 第113-114页 |
·农杆菌EHA105 介导的烟草转化 | 第114-115页 |
·转基因植株的检测 | 第115-116页 |
·转基因植株的分析 | 第116-119页 |
3 结果 | 第119-125页 |
·目的基因ClEXP1、ClEXP2 的菌液PCR 鉴定 | 第119页 |
·目的基因ClEXP1、ClEXP2 酶切回收 | 第119页 |
·表达载体pCAMBIA 1301 的双酶切 | 第119-120页 |
·p1301-ClEXP1 和p1301-ClEXP2 的鉴定 | 第120页 |
·过量表达ClEXP1、ClEXP2 的转基因烟草呈现多效的(pleiotropic)表型. | 第120-123页 |
·转基因植株内源相关基因的表达分析 | 第123页 |
·转基因植株纤维素含量变化 | 第123-125页 |
·转基因植株髓薄壁细胞变化 | 第125页 |
4 讨论 | 第125-128页 |
·杉木expansins 高度冗余且不是唯一细胞壁松弛因子 | 第125页 |
·过量表达杉木expansins 的转基因烟草呈现多效的(pleiotropic)表型 | 第125-127页 |
·过量表达杉木expansins 影响转基因烟草的细胞形态和组成 | 第127页 |
·Expansins 在木质细胞生长中的作用 | 第127-128页 |
参考文献 | 第128-132页 |
第七章 总结 | 第132-135页 |
1 主要结论 | 第132-134页 |
2 存在的问题 | 第134页 |
3 今后的研究方向 | 第134-135页 |