| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-14页 |
| 英汉缩写词简表 | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-20页 |
| 实验流程总图 | 第20-26页 |
| 第一章:构建真核质粒表达载体PcDNA3.1(-)Grp78p VP_3-Myc-CMV,PcDNA3.1(-)Hre_2.Grp78p.VP_3-Myc-CMV和PcDNA3.1(-)CMV.VP_3-Myc | 第26-43页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·质粒 | 第26-27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·主要的仪器设备 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-32页 |
| ·PcDNA3.1(-)Grp78p.VP3-Myc的构建 | 第28-30页 |
| ·PcDNA3.1(-)Hre2.Grp78p.VP_3-Myc的构建 | 第30页 |
| ·PcDNA3.1(-)CMV.VP_3-Myc的构建 | 第30-31页 |
| ·PcDNA3.1(-)VP_3-Myc,PcDNA3.1(-)Grp78p.VP_3-Myc,PcDNA3.1(-)Hre_2.Grp78p.VP_3-Myc的巨细胞启动子的切除 | 第31-32页 |
| ·结果 | 第32-40页 |
| ·Grp78pPCR 产物扩增结果 | 第32页 |
| ·真核质粒表达载体的CMV的酶切鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·切除巨细胞启动子的PcDNA3.1(-)Grp78p.VP_3的构建 | 第33-35页 |
| ·切除巨细胞启动子的PCDNA3.1(-)Hre_2.Grp78p.VP_3质粒的测序结果 | 第35-37页 |
| ·PCDNA3.1(-)VP_3-CMV质粒的测序结果 | 第37-39页 |
| ·PCDNA3.1(-)CMV.VP_3-Myc质粒的测序结果 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| ·结论 | 第42-43页 |
| 第二章:VP_3基因对鼻咽癌细胞CNE-2的杀伤作用 | 第43-53页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·质粒和细胞株 | 第43页 |
| ·引物 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43-44页 |
| ·主要仪器和设备 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-48页 |
| ·细胞培养及处理 | 第44页 |
| ·质粒PGV,PHGV和PVP3的大抽提及纯化 | 第44-45页 |
| ·将纯化质粒PGV,PHGV和PVP3转染CNE-2细胞株 | 第45页 |
| ·RT-PCR鉴定目的基因的表达 | 第45-46页 |
| ·免疫印迹分析检测转染后VP3-Myc的蛋白表达水平 | 第46-47页 |
| ·细胞存活率测定 | 第47页 |
| ·统计学处理 | 第47-48页 |
| ·结果 | 第48-50页 |
| ·瞬时转染后CNE-2细胞VP_3基因的RT-PCR的表达结果 | 第48页 |
| ·瞬时转梁后CNE-2细胞VP_3-myc基因的蛋白表达结果 | 第48-49页 |
| ·瞬时转染后不同时间CNE-2细胞的存活率 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| ·结论 | 第52-53页 |
| 第三章:5-氨基酮戊酸介导的光动力对人鼻咽癌CNE-2细胞株的杀伤作用 | 第53-61页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·细胞株及培养条件 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| ·仪器 | 第53-54页 |
| ·方法 | 第54-55页 |
| ·细胞培养 | 第54页 |
| ·光敏剂的准备 | 第54页 |
| ·细胞处理 | 第54-55页 |
| ·细胞存活率测定 | 第55页 |
| ·统计学分析 | 第55页 |
| ·结果 | 第55-59页 |
| ·5-ALA在CNE-2细胞中的定位 | 第55-56页 |
| ·各组细胞在不同处理条件下的存活率比较 | 第56-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·结论 | 第60-61页 |
| 第四章:HRE_2.Grp_(78p)嵌合启动子调控VP_3表达结合鼻咽癌5-ALA-PDT/基因治疗的研究 | 第61-79页 |
| ·材料 | 第61-62页 |
| ·质粒和细胞株 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61-62页 |
| ·主要仪器设备 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-65页 |
| ·细胞培养 | 第62页 |
| ·细胞处理 | 第62页 |
| ·实验分组 | 第62-63页 |
| ·质粒瞬时转染CNE-2细胞 | 第63页 |
| ·转染后的光动力治疗 | 第63页 |
| ·CCK-8比色法测定基因治疗,光动力治疗以及基因联合光动力治疗的存活率 | 第63-64页 |
| ·Western-blotting检测转染后和转染联合光动力治疗后靶向基因的蛋白表达水平 | 第64页 |
| ·流式细胞术(FCM)观察基因治疗,光动力治疗以及基因联合光动力治疗的细胞凋亡 | 第64-65页 |
| ·电镜观察基因治疗,光动力治疗以及基因联合光动力治疗的超微结构 | 第65页 |
| ·统计学处理 | 第65页 |
| ·结果 | 第65-76页 |
| ·基因治疗,光动力治疗以及基因联合光动力治疗的鼻咽癌细胞CNE-2存活率的比较 | 第65-66页 |
| ·基因治疗和基因联合光动力治疗后靶向基因的蛋白表达水平情况 | 第66-71页 |
| ·流式细胞术(FCM)观察基因治疗,光动力治疗以及基因联合光动力治疗的细胞凋亡的结果 | 第71-74页 |
| ·观察基因治疗,光动力治疗以及基因联合光动力治疗后CNE-2形态学变化 | 第74-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| ·结论 | 第78-79页 |
| 总结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-89页 |
| 综述 | 第89-102页 |
| 致谢 | 第102-104页 |
| 攻读学位期间主要研究成果 | 第104页 |
