| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第14-28页 |
| 1.1 淀粉及淀粉酶 | 第14-16页 |
| 1.1.1 淀粉的结构及特性 | 第14-15页 |
| 1.1.2 淀粉酶 | 第15-16页 |
| 1.2 β-淀粉酶 | 第16-20页 |
| 1.2.1 β-淀粉酶来源 | 第16页 |
| 1.2.2 β-淀粉酶结构与催化机理 | 第16-17页 |
| 1.2.3 β-淀粉酶酶活的测定方法 | 第17-18页 |
| 1.2.4 β-淀粉酶的应用 | 第18-19页 |
| 1.2.5 微生物来源的β-淀粉酶重组表达研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌基因表达系统概述 | 第20-23页 |
| 1.3.1 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第20-21页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌表达系统的控制元件 | 第21-23页 |
| 1.4 枯草芽孢杆菌碳分解代谢物阻遏效应 | 第23-25页 |
| 1.4.1 细菌磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸转移酶系统转运机制 | 第24页 |
| 1.4.2 碳分解代谢物阻遏效应的机制 | 第24-25页 |
| 1.5 论文研究的主要内容及意义 | 第25-28页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第25-26页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第26-28页 |
| 第二章 β-淀粉酶在枯草芽孢杆菌系统中高效表达 | 第28-57页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-32页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第28-29页 |
| 2.2.2 引物序列 | 第29页 |
| 2.2.3 试剂与试剂盒 | 第29-30页 |
| 2.2.4 培养基 | 第30-31页 |
| 2.2.5 主要仪器与设备 | 第31-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-44页 |
| 2.3.1 pBE-Amy M载体的构建 | 第32-34页 |
| 2.3.2 pBE-Amy M质粒转化大肠杆菌克隆及验证 | 第34-36页 |
| 2.3.3 单启动子pBE-promoter-Amy M表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 2.3.4 pBE-promoter-Amy M质粒的克隆与验证 | 第37-38页 |
| 2.3.5 含有单启动子质粒在枯草芽孢杆菌中的转化 | 第38-40页 |
| 2.3.6 β-淀粉酶的酶活力测定 | 第40页 |
| 2.3.7 单启动子重组菌株酶活水平测定 | 第40-41页 |
| 2.3.8 双启动子pBE-P43-promoter-Amy M表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 2.3.9 pBE-P43-promoter-Amy M质粒的克隆与验证 | 第42页 |
| 2.3.10 双启动子重组质粒在枯草芽孢杆菌中的转化、验证及发酵 | 第42页 |
| 2.3.11 双启动子重组菌株酶活水平测定 | 第42页 |
| 2.3.12 突变型Amy M-CRE重组质粒的构建 | 第42-43页 |
| 2.3.13 突变型Amy M-CRE重组质粒在宿主中的转化 | 第43页 |
| 2.3.14 突变型Amy M-CRE重组菌株摇瓶发酵及酶活测定 | 第43-44页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第44-55页 |
| 2.4.1 β-淀粉酶基因生物信息分析 | 第44-45页 |
| 2.4.2 β-淀粉酶基因和pBE载体片段的扩增与验证 | 第45-46页 |
| 2.4.3 载体pBE-Amy M构建、克隆与验证 | 第46-47页 |
| 2.4.4 单启动子pBE-promoter-Amy M表达载体的构建与验证 | 第47-49页 |
| 2.4.5 单启动子质粒转化宿主B.subtilis ATCC6051?10 的验证 | 第49页 |
| 2.4.6 单启动子对β-淀粉酶表达水平的影响 | 第49-51页 |
| 2.4.7 双启动子pBE-P43-Promoter-Amy M质粒的构建与验证 | 第51-52页 |
| 2.4.8 双启动子对β-淀粉酶表达水平的影响 | 第52-53页 |
| 2.4.9 突变型Amy M-CRE重组载体的构建、克隆与转化 | 第53-54页 |
| 2.4.10 缓解CCR效应对重组菌株β-淀粉酶酶活水平的影响 | 第54-55页 |
| 2.5 本章小结 | 第55-57页 |
| 第三章 发酵菌株摇瓶培养条件的优化 | 第57-67页 |
| 3.1 引言 | 第57页 |
| 3.2 实验材料 | 第57-58页 |
| 3.2.1 菌种 | 第57页 |
| 3.2.2 试剂与培养基 | 第57页 |
| 3.2.3 主要仪器与设备 | 第57-58页 |
| 3.3 实验方法 | 第58-59页 |
| 3.3.1 生长曲线的测定 | 第58页 |
| 3.3.2 发酵培养基成份的优化 | 第58页 |
| 3.3.3 发酵不同条件的优化 | 第58-59页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第59-65页 |
| 3.4.1 生长曲线的绘制 | 第59页 |
| 3.4.2 培养基成份的优化 | 第59-64页 |
| 3.4.3 摇瓶培养条件的优化 | 第64-65页 |
| 3.5 本章小结 | 第65-67页 |
| 第四章 重组β-淀粉酶纯化、酶学性质及应用效果研究 | 第67-79页 |
| 4.1 引言 | 第67页 |
| 4.2 实验材料 | 第67-68页 |
| 4.2.1 菌种与质粒 | 第67页 |
| 4.2.2 试剂 | 第67页 |
| 4.2.3 培养基 | 第67-68页 |
| 4.2.4 主要仪器与设备 | 第68页 |
| 4.3 实验方法 | 第68-72页 |
| 4.3.1 重组β-淀粉酶的纯化和蛋白含量的测定 | 第68-69页 |
| 4.3.2 重组β-淀粉酶SDS-PAGE蛋白电泳及Western blot分析 | 第69-70页 |
| 4.3.3 重组β-淀粉酶的酶学性质分析 | 第70-71页 |
| 4.3.4 重组β-淀粉酶在糖化反应过程中的应用 | 第71-72页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第72-78页 |
| 4.4.1 重组β-淀粉酶的亲和层析纯化 | 第72-73页 |
| 4.4.2 重组β-淀粉酶酶学性质分析 | 第73-76页 |
| 4.4.3 重组β-淀粉酶在糖化过程的应用效果 | 第76-78页 |
| 4.5 本章小结 | 第78-79页 |
| 结论与展望 | 第79-81页 |
| 结论 | 第79-80页 |
| 展望 | 第80-81页 |
| 本论文创新点 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-91页 |
| 附录 | 第91-95页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 附件 | 第98页 |
