| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 文献综述 | 第9-25页 |
| 1 双生病毒的概况 | 第9-18页 |
| ·双生病毒的分类与基因组结构 | 第9-10页 |
| ·Mastrevirus 属 | 第10页 |
| ·Curtovirus 属 | 第10页 |
| ·Topocuvirus 属 | 第10页 |
| ·Begomovirus 属 | 第10页 |
| ·菜豆金色花叶病毒的基因组结构及功能 | 第10-11页 |
| ·双生病毒的侵染过程 | 第11-15页 |
| ·双生病毒的粒子包壳和介体传毒 | 第11-12页 |
| ·双生病毒在植物体内的增殖 | 第12-14页 |
| ·双生病毒的转录 | 第14-15页 |
| ·双生病毒的遗传变异 | 第15-17页 |
| ·双生病毒的遗传变异 | 第16页 |
| ·遗传变异的类型 | 第16-17页 |
| ·双生病毒的危害及控制 | 第17-18页 |
| ·危害 | 第17-18页 |
| ·控制 | 第18页 |
| 2 昆虫内共生菌研究概况 | 第18-21页 |
| ·内共生菌的特点 | 第18-19页 |
| ·内共生菌在昆虫中的分布 | 第19-20页 |
| ·烟粉虱的内共生菌 | 第20页 |
| ·昆虫内共生菌产生的GroEL 蛋白 | 第20-21页 |
| ·病毒虫传相关蛋白研究的科学意义与展望 | 第21页 |
| 3 RNA 沉默与植物抗病毒特性 | 第21-25页 |
| ·RNA 沉默的机制 | 第22-23页 |
| ·植物中的转录后基因沉默(PTGS) | 第23-24页 |
| ·转基因植物的共抑制现象 | 第23页 |
| ·RNA 介导的病毒抗性(RMVR) | 第23页 |
| ·病毒诱导的基因沉默(VIGS) | 第23-24页 |
| ·RNA 沉默的病毒抑制子 | 第24-25页 |
| 引言 | 第25-28页 |
| 1 本课题研究目的及意义 | 第25-26页 |
| ·GroEL 蛋白 | 第25页 |
| ·基因沉默 | 第25-26页 |
| 2 主要研究内容 | 第26-27页 |
| 3 采取的技术路线 | 第27-28页 |
| 材料与方法 | 第28-38页 |
| 1 试验材料 | 第28页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·昆虫材料 | 第28页 |
| ·菌种和质粒 | 第28页 |
| 2 仪器设备和试剂 | 第28-29页 |
| ·仪器和设备 | 第28页 |
| ·试剂 | 第28-29页 |
| ·PCR 引物 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| 3 实验方法 | 第29-38页 |
| ·GroEL 基因的克隆 | 第29-32页 |
| ·烟粉虱DNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·GroEL 基因的PCR 扩增与回收纯化 | 第30-31页 |
| ·克隆载体pEASY-GroEL 的获得 | 第31-32页 |
| ·SUC_2 基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·拟南芥DNA 的提取 | 第32页 |
| ·SUC_2 基因的PCR 扩增与回收纯化 | 第32-33页 |
| ·克隆载体pEASY- SUC_2 的获得 | 第33页 |
| ·AC1、AC_2 重叠片段的获得 | 第33-34页 |
| ·TYLCV 病叶DNA 的提取 | 第33页 |
| ·AC1、AC_2 重叠基因AC 的PCR 扩增与回收纯化 | 第33-34页 |
| ·克隆载体pEASY-B/H、pEASY-X/S 的获得 | 第34页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·P-GroEL 和P-PGHNBS-GroEL 载体的构建 | 第34页 |
| ·P-SUC_2-GroEL 载体的构建 | 第34页 |
| ·pBI121-AC 载体的构建 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第35页 |
| ·植物表达载体向农杆菌的转化 | 第35-36页 |
| ·农杆菌的感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·转化 | 第35页 |
| ·农杆菌的培养 | 第35页 |
| ·烟草叶片的准备 | 第35页 |
| ·农杆菌浸染 | 第35页 |
| ·共培养、筛选培养、继代培养 | 第35-36页 |
| ·生根培养 | 第36页 |
| ·土壤种植 | 第36页 |
| ·总RNA 提取和cDNA 的合成 | 第36-37页 |
| ·烟草RNA 的提取 | 第36页 |
| ·cDNA 的合成 | 第36-37页 |
| ·病毒接种 | 第37-38页 |
| 结果与分析 | 第38-44页 |
| 1 P-GroEL、P-PGHNBS-GroEL 和P-SUC_2-GroEL 植物表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·GroEL 基因的克隆 | 第38页 |
| ·植物表达载体的构建及酶切验证 | 第38-39页 |
| 2 反向重复植物表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·番茄黄化曲叶病毒AC1、AC_2 基因的克隆 | 第39页 |
| ·反向重复表达载体 pBI121-AC 的构建及酶切验证 | 第39-40页 |
| 3 转基因烟草植株的获得 | 第40-41页 |
| 4 转基因烟草植株的分子检测 | 第41-42页 |
| ·转P-GroEL、P-PGHNBS-GroEL 和P-SUC_2-GroEL 载体的分子检测 | 第41-42页 |
| ·转P-GroEL、P-PGHNBS-GroEL 和P-SUC_2-GroEL 载体的PCR 检测 | 第41页 |
| ·转P-GroEL、P-PGHNBS-GroEL 和P-SUC_2-GroEL 载体的RT-PCR 检测 | 第41-42页 |
| ·反向重复表达载体 pBI121-AC 的 PCR 检测 | 第42页 |
| 5 烟草抗性植株抗病毒的检测分析 | 第42-44页 |
| ·转P-GroEL、P-PGHNBS-GroEL 和P-SUC_2-GroEL 载体的转基因烟草植株对TY的抗性分析 | 第42-43页 |
| ·反向重复表达载体pBI121-AC的转基因烟草抗性植株抗病毒的PCR检测 | 第43-44页 |
| 讨论 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61-62页 |
| 附录A：常用缓冲液及培养基配方 | 第62-64页 |
| 附录B：常用的抗生素及使用浓度 | 第64页 |
