| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第11-22页 |
| ·金属硫蛋白研究进展 | 第11-13页 |
| ·植物MT的分类 | 第13-14页 |
| ·植物金属硫蛋白的特征 | 第14-15页 |
| ·植物金属硫蛋白的性质 | 第14页 |
| ·植物金属硫蛋白的结构 | 第14-15页 |
| ·植物金属硫蛋白的分子生物学特性 | 第15-17页 |
| ·植物金属硫蛋白基因特异性表达 | 第17-18页 |
| ·植物金属硫蛋白的功能 | 第18-22页 |
| ·参与金属离子的运输和供给 | 第19页 |
| ·解除金属离子的毒害及维持细胞内环境的稳定 | 第19-20页 |
| ·植物金属硫蛋白与活性氧清除 | 第20-21页 |
| ·植物金属硫蛋白在基因工程中的应用 | 第21-22页 |
| ·结语与展望 | 第22页 |
| 2 实验目的与意义 | 第22-23页 |
| 3 材料与方法 | 第23-37页 |
| ·质粒、菌株、动物 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·常用缓冲液、试剂和培养基 | 第23-26页 |
| ·细菌培养相关试剂 | 第23-24页 |
| ·SDS-PAGE电泳相关试剂 | 第24页 |
| ·菌细胞裂解及蛋白纯化相关试剂 | 第24-25页 |
| ·ELISA实验相关试剂 | 第25-26页 |
| ·Western-blot相关试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·pGEX-2T-EhMT1融合表达载体的构建 | 第26-31页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第26-28页 |
| ·EhMT1片段的PCR扩增及产物回收 | 第28-29页 |
| ·回收产物与克隆载体pGEM-T easy vector的连接反应 | 第29页 |
| ·连接产物的转化及克隆鉴定 | 第29-30页 |
| ·质粒DNA的抽提 | 第30页 |
| ·表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·EhMT1基因的原核表达鉴定 | 第31-33页 |
| ·重组质粒pGEX-2T-EhMT1的诱导表达 | 第31-33页 |
| ·GST-EhMT1融合蛋白表达形式分析 | 第33页 |
| ·GST-EhMT1融合蛋白表达条件优化 | 第33页 |
| ·GST-EhMT1融合蛋白的纯化 | 第33-35页 |
| ·GST-EhMT1融合蛋白的大量表达 | 第33-34页 |
| ·融合蛋白的亲和层析 | 第34页 |
| ·纯化后的融合蛋白浓度测定(Brandford法) | 第34-35页 |
| ·融合蛋白的凝胶纯化 | 第35页 |
| ·GST-EhMT1融合蛋白多克隆抗体的制备 | 第35-37页 |
| ·免疫实验 | 第35页 |
| ·抗体效价的ELISA检测 | 第35-36页 |
| ·Western blotting检测抗体的特异性 | 第36-37页 |
| 4 结果与分析 | 第37-44页 |
| ·pGEX-2T-EhMT1融合表达载体的构建 | 第37-39页 |
| ·EhMT1片段的PCR扩增及产物回收 | 第37页 |
| ·重组质粒pGEM-T-EhMT1的阳性鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组质粒pGEX-2T-EhMT1的阳性鉴定 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白GST-EhMT1的原核表达 | 第39-43页 |
| ·EhMT1基因的原核表达鉴定 | 第39-40页 |
| ·融合蛋白表达形式鉴定 | 第40页 |
| ·原核表达条件的优化 | 第40-42页 |
| ·GST-EhMT1大量表达与纯化 | 第42-43页 |
| ·GST-EhMT1多克隆抗体的制备 | 第43-44页 |
| ·抗血清效价的测定 | 第43页 |
| ·抗体特异性的测定 | 第43-44页 |
| 5 讨论 | 第44-49页 |
| ·pGEX-2T-EhMT1融合表达体系的构建 | 第44-47页 |
| ·表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·表达条件的优化 | 第46-47页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 附件 | 第58页 |
