| 摘要 | 第1-6页 |
| Summary | 第6-8页 |
| 缩写词英汉对照表 | 第8-15页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一章 猪流行性腹泻病毒DX 株全基因组的克隆分析与N 蛋白的原核表达 | 第16-54页 |
| 第一节 猪流行性腹泻病毒结构蛋白基因的克隆与特征分析 | 第17-38页 |
| ·材料与方法 | 第18-24页 |
| ·试验材料 | 第18页 |
| ·试验方法 | 第18-24页 |
| ·结果与分析 | 第24-35页 |
| ·PEDV DX 结构蛋白基因的RT-PCR 扩增 | 第24页 |
| ·PCR 产物的克隆与鉴定 | 第24-26页 |
| ·核苷酸序列的测定 | 第26页 |
| ·PEDV S 基因的序列及其特性分析 | 第26-29页 |
| ·PEDV M 基因的序列及其特性分析 | 第29-31页 |
| ·PEDV N 基因的序列及其特性分析 | 第31-34页 |
| ·PEDV sM 基因的序列及其特性分析 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-38页 |
| 第二节 猪流行性腹泻病毒聚合酶及ORF3 的克隆与特征分析 | 第38-45页 |
| ·材料与方法 | 第38-40页 |
| ·试验材料 | 第38页 |
| ·试验方法 | 第38-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-44页 |
| ·PEDV DX ORF1 及ORF3 基因的RT-PCR 扩增 | 第40-41页 |
| ·PCR 产物的克隆与鉴定 | 第41页 |
| ·序列的测定及拼接 | 第41-42页 |
| ·DX 株聚合酶基因的序列比较及其特性分析 | 第42-43页 |
| ·PEDV DX 株ORF3 序列及其特性分析 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| 第三节 猪流行性腹泻病毒DX 株N 蛋白的原核表达 | 第45-52页 |
| ·材料与方法 | 第45-49页 |
| ·试验材料 | 第45页 |
| ·试验方法 | 第45-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-51页 |
| ·N 基因的RT-PCR 扩增及鉴定 | 第49页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第49-50页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| 第二章 猪流行性腹泻病毒S+N 基因腺病毒表达载体的构建 | 第54-66页 |
| 1 材料和方法 | 第55-60页 |
| ·毒株与细胞 | 第55页 |
| ·载体及菌株 | 第55页 |
| ·工具酶及其它试剂盒 | 第55页 |
| ·细胞培养 | 第55页 |
| ·病毒RNA 的提取 | 第55-56页 |
| ·S 中和抗原位点和N 基因的制备 | 第56页 |
| ·S 中和抗原位点片段和N 基因的连接 | 第56-57页 |
| ·重组腺病毒穿梭载体的构建 | 第57-58页 |
| ·同源重组用线性化重组腺病毒穿梭载体的获得 | 第58-59页 |
| ·AdEasier-1 BJ5183 菌细菌感受态的制备 | 第59页 |
| ·电转化 AdEasier-1 BJ5183 细菌感受态细胞 | 第59页 |
| ·复制缺陷型重组腺病毒质粒的鉴定 | 第59-60页 |
| ·用重组腺病毒质粒转化宿主菌 DH10B | 第60页 |
| ·转染AD-293 细胞获得重组腺病毒 | 第60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-63页 |
| ·S 中和抗原位点和N 基因的扩增和鉴定 | 第60-61页 |
| ·S 中和抗原位点和N 基因在pQIC-X 载体上的连接及鉴定 | 第61页 |
| ·重组腺病毒穿梭载体的构建 | 第61-62页 |
| ·获得复制缺陷型腺病毒质粒 | 第62页 |
| ·重组腺病毒的收获及鉴定 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-66页 |
| 第三章 猪传染性胃肠炎病毒TS 株全基因特征及在不同细胞上的传代特性 | 第66-93页 |
| 第一节 猪传染性胃肠炎病毒TS 株结构蛋白基因的克隆及特性分析 | 第67-78页 |
| ·材料与方法 | 第67-69页 |
| ·试验材料 | 第67页 |
| ·试验方法 | 第67-69页 |
| ·结果与分析 | 第69-76页 |
| ·TGEV TS 株S、sM、M 和N 的RT-PCR 扩增 | 第69页 |
| ·PCR 产物的克隆与鉴定 | 第69-70页 |
| ·序列的测定及拼接 | 第70页 |
| ·TS 株结构蛋白基因的序列比较及其特性分析 | 第70-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| 第二节 猪传染性胃肠炎病毒TS 株非结构蛋白基因及非编码区的克隆及特性分析 | 第78-86页 |
| ·材料与方法 | 第78-79页 |
| ·试验材料 | 第78页 |
| ·试验方法 | 第78-79页 |
| ·结果与分析 | 第79-84页 |
| ·TGEV TS ORF1、ORF3 和ORF7 的RT-PCR 扩增 | 第79页 |
| ·PCR 产物的克隆与鉴定 | 第79-80页 |
| ·序列的测定及拼接 | 第80-81页 |
| ·TS 株结构蛋白基因的序列比较及其特性分析 | 第81-84页 |
| ·讨论 | 第84-86页 |
| 第三节 猪传染性胃肠炎病毒在不同细胞传代的特性 | 第86-91页 |
| ·材料与方法 | 第86-87页 |
| ·试验材料 | 第86页 |
| ·试验方法 | 第86-87页 |
| ·结果与分析 | 第87-90页 |
| ·PK-15 细胞胰酶耐受性 | 第87-88页 |
| ·TGEV 在不同细胞中的传代 | 第88-89页 |
| ·TGEV 传代不同细胞50 代3’基因组的克隆 | 第89-90页 |
| ·TGEV TS 在ST 细胞和PK-15 细胞培养50 代后3’基因的序列分析 | 第90页 |
| ·讨论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-93页 |
| 第四章 猪传染性胃肠炎病毒S+N 基因腺病毒表达载体的构建 | 第93-101页 |
| 1 材料与方法 | 第94-96页 |
| ·试验材料 | 第94页 |
| ·毒株与细胞 | 第94页 |
| ·载体及菌株 | 第94页 |
| ·工具酶及其它试剂盒 | 第94页 |
| ·试验方法 | 第94-96页 |
| ·细胞培养 | 第94-95页 |
| ·病毒RNA 的提取 | 第95页 |
| ·S 中和抗原位点和N 基因的制备 | 第95页 |
| ·TGEV S 基因 AD 抗原位点片段和N 基因的连接 | 第95页 |
| ·含感受态细胞的准备 | 第95页 |
| ·重组腺病毒穿梭载体的构建 | 第95-96页 |
| ·重组腺病毒质粒的构建 | 第96页 |
| ·转染AD-293 细胞获得重组腺病毒 | 第96页 |
| 2 结果与分析 | 第96-99页 |
| ·TGEV TS S AD 位点和N 基因的RT-PCR 扩增 | 第96页 |
| ·S AD 位点和N 基因在pQICX 载体上的连接及鉴定 | 第96-97页 |
| ·重组腺病毒穿梭载体的构建 | 第97页 |
| ·获得复制缺陷型腺病毒质粒 | 第97-98页 |
| ·重组腺病毒的收获及鉴定 | 第98-99页 |
| 3 讨论 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-101页 |
| 第五章 表达绿色荧光蛋白猪传染性胃肠炎缺陷性病毒载体的构建 | 第101-113页 |
| 1 材料与方法 | 第102-107页 |
| ·试验材料 | 第102页 |
| ·试验方法 | 第102-107页 |
| ·病毒的增殖与收获 | 第102页 |
| ·病毒RNA 的提取 | 第102页 |
| ·引物的设计与合成 | 第102页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第102页 |
| ·PCR 产物的纯化回收 | 第102-103页 |
| ·连接反应 | 第103页 |
| ·连接反应 | 第103页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第103页 |
| ·转化 | 第103页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第103-104页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第104页 |
| ·重组质粒PCR 鉴定 | 第104页 |
| ·pSL1180 载体的改造和鉴定 | 第104-105页 |
| ·pSL-M33 载体的构建和鉴定 | 第105-106页 |
| ·表达荧光蛋白的pSL-M33-GFP 载体的构建和鉴定 | 第106页 |
| ·缺陷性病毒荧光蛋白的表达 | 第106-107页 |
| 2 结果与分析 | 第107-110页 |
| ·构建缺陷性病毒载体片段的克隆 | 第107-108页 |
| ·构建缺陷性病毒载体片段的鉴定 | 第108页 |
| ·构建缺陷性病毒载体片段的鉴定 | 第108-109页 |
| ·pSL1180-CMV-BGH 载体的鉴定 | 第108-109页 |
| ·pSL1180-M33 载体的构建及鉴定 | 第109页 |
| ·pSL1180-M33 荧光表达载体的构建及鉴定 | 第109页 |
| ·缺陷性病毒载体在辅助病毒作用下荧光的表达 | 第109-110页 |
| 3 讨论 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-113页 |
| 第六章 猪流行性腹泻病毒分子生物学研究进展 | 第113-120页 |
| 1 一般生物学特性 | 第113页 |
| 2 基因组结构及表达方式 | 第113-114页 |
| 3 基因及其蛋白的研究 | 第114-117页 |
| ·聚合酶基因 | 第114-115页 |
| ·S 基因 | 第115页 |
| ·开放阅读框架ORF3 | 第115-116页 |
| ·sM (small membrane) 基因 | 第116页 |
| ·M (membrane) 基因 | 第116页 |
| ·N (nucleocapsid) 基因 | 第116-117页 |
| 4 PEDV 分子生物学检测 | 第117页 |
| 5 展望 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-120页 |
| 第七章 猪传染性胃肠炎病毒分子生物学研究进展 | 第120-131页 |
| 1 一般生物学特性 | 第120页 |
| 2 基因组结构及表达方式 | 第120-121页 |
| 3 基因及其蛋白的研究 | 第121-124页 |
| ·S 基因 | 第121-123页 |
| ·M 基因 | 第123页 |
| ·N 基因 | 第123页 |
| ·sM 基因 | 第123页 |
| ·基因1 | 第123-124页 |
| ·基因3 | 第124页 |
| ·基因7 | 第124页 |
| ·非编码区 | 第124页 |
| 4 感染性cDNA 的研究 | 第124-125页 |
| 5 TGEV 的组织嗜性 | 第125页 |
| 6 TGEV 的变异性和免疫 | 第125-126页 |
| 7 TGEV 分子生物学检测技术 | 第126-127页 |
| 8 展望 | 第127-128页 |
| 参考文献 | 第128-131页 |
| 结论 | 第131-132页 |
| 附录 | 第132-153页 |
| 附录1 TGEV TS 全基因组核苷酸序列（Genbank: DQ201447） | 第132-143页 |
| 附录2 PEDV DX 结构蛋白和ORF3 核苷酸序列(Genbank:EU031893) | 第143-146页 |
| 附录3 PEDV DX 非结构蛋白ORF1 核苷酸序列 | 第146-153页 |
| 导师简介 | 第153-154页 |
| 作者简介 | 第154页 |
