| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-12页 |
| 缩略词表 | 第12-22页 |
| 第一部分 文献综述 | 第22-63页 |
| 第一章 铅的肾毒性及作用机理研究进展 | 第22-41页 |
| 第二章 镉的肾毒性及作用机理研究进展 | 第41-59页 |
| 第三章 铅镉联合毒性作用及机理研究进展 | 第59-63页 |
| 第二部分 体内试验研究 | 第63-146页 |
| 第一章 铅镉联合对大鼠生长发育的影响 | 第64-71页 |
| 1 材料 | 第64页 |
| ·试验动物 | 第64页 |
| ·主要化学试剂和仪器 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-65页 |
| ·毒液的配制 | 第64页 |
| ·试验分组及染毒 | 第64-65页 |
| ·血液和肾皮质样品采集 | 第65页 |
| ·血清和肾皮质中铅镉含量测定 | 第65页 |
| ·数据分析 | 第65页 |
| 3 结果 | 第65-69页 |
| ·染毒期间大鼠摄入毒物量与染毒结束血清和肾皮质中铅镉含量 | 第65-66页 |
| ·染毒期间大鼠生长发育状况及体重变化 | 第66-68页 |
| ·染毒结束大鼠肾脏重量与肾脏系数的变化 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-71页 |
| 第二章 铅镉联合对大鼠肾脏功能损伤的研究 | 第71-85页 |
| 1 材料 | 第71-72页 |
| ·试验动物及处理 | 第71页 |
| ·尿样与血清样品采集 | 第71页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第71-72页 |
| 2 方法 | 第72页 |
| ·检测方法 | 第72页 |
| ·数据分析 | 第72页 |
| 3 结果 | 第72-81页 |
| ·铅镉暴露对尿酶活性的影响 | 第72-76页 |
| ·铅镉暴露对尿蛋白含量动态变化的影响 | 第76-79页 |
| ·铅镉暴露对血清肌酐与尿素氮含量的影响 | 第79-80页 |
| ·铅镉暴露对大鼠尿量的影响 | 第80-81页 |
| 4 讨论 | 第81-83页 |
| ·铅镉染毒后尿酶活性变化与肾小管损伤的关系 | 第81-82页 |
| ·铅镉染毒后尿蛋白含量变化与肾脏功能损伤的关系 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-85页 |
| 第三章 铅镉联合对大鼠机体抗氧化性能的影响 | 第85-100页 |
| 1 材料 | 第85页 |
| ·试验动物及处理 | 第85页 |
| ·血清与肾脏皮质样品采集 | 第85页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第85页 |
| 2 方法 | 第85-86页 |
| ·检测方法 | 第85-86页 |
| ·数据分析 | 第86页 |
| 3 结果 | 第86-94页 |
| ·铅镉暴露对大鼠血清和肾皮质中过氧化脂质含量的影响 | 第86-87页 |
| ·铅镉暴露对大鼠血清和肾皮质中抗氧化剂水平的影响 | 第87-90页 |
| ·铅镉暴露对大鼠血清和肾皮质中抗氧化微量元素含量的影响 | 第90-94页 |
| 4 讨论 | 第94-97页 |
| 参考文献 | 第97-100页 |
| 第四章 铅镉联合对大鼠肾皮质病理学损伤的研究 | 第100-108页 |
| 1 材料 | 第100页 |
| ·试验动物及处理 | 第100页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第100页 |
| 2 方法 | 第100-102页 |
| ·肾皮质块样品采集及固定 | 第100页 |
| ·大鼠肾皮质病理组织学观察 | 第100页 |
| ·大鼠肾皮质组织超微结构观察 | 第100-102页 |
| 3 结果 | 第102-105页 |
| ·光镜观察结果 | 第102-103页 |
| ·透射电镜观察结果 | 第103-105页 |
| 4 讨论 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-108页 |
| 第五章 铅镉联合对尿液中微量元素排泄规律的研究 | 第108-119页 |
| 1 材料 | 第108页 |
| ·试验动物及处理 | 第108页 |
| ·尿液样品采集 | 第108页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第108页 |
| 2 方法 | 第108-109页 |
| ·检测方法 | 第108页 |
| ·数据分析 | 第108-109页 |
| 3 结果 | 第109-115页 |
| ·染毒期间大鼠尿液中铅、镉含量的动态变化 | 第109-110页 |
| ·染毒期间大鼠尿液中抗氧化微量元素含量的动态变化 | 第110-115页 |
| 4 讨论 | 第115-117页 |
| ·微量元素Zn、Cu、Mn、Fe和Se的生物学效应 | 第115-116页 |
| ·铅、镉对大鼠尿液中微量元素Cu、Fe、Zn、Mn和Se排泄的影响 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-119页 |
| 第六章 铅镉联合对肾皮质线粒体氧化损伤的影响 | 第119-134页 |
| 1 材料 | 第119-120页 |
| ·试验动物及处理 | 第119页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第119-120页 |
| 2 方法 | 第120-125页 |
| ·采样前的准备 | 第120页 |
| ·样品采集 | 第120页 |
| ·大鼠肾皮质部线粒体超微结构观察 | 第120页 |
| ·总RNA 的提取 | 第120-121页 |
| ·线粒体细胞色素氧化酶亚基COX-I/II/III mRNA 的FQ-PCR 分析 | 第121-125页 |
| ·引物设计 | 第121-122页 |
| ·cDNA制备 | 第122页 |
| ·荧光定量PCR 反应 | 第122-123页 |
| ·比较Ct法的相对定量 | 第123-125页 |
| ·数据分析 | 第125页 |
| 3 结果 | 第125-129页 |
| ·铅镉暴露对大鼠肾皮质脂质过氧化物含量的影响 | 第125页 |
| ·铅镉暴露对大鼠肾皮质线粒体超微结构的影响 | 第125-126页 |
| ·铅镉暴露对COX-I、COX-II、COX-III 基因表达的影响 | 第126-129页 |
| ·总RNA 检测及熔解曲线分析 | 第126-127页 |
| ·COX-I、COX-II、COX-III 基因表达定量分析结果 | 第127-129页 |
| 4 讨论 | 第129-131页 |
| 参考文献 | 第131-134页 |
| 第七章 铅镉联合对肾皮质金属硫蛋白表达的影响 | 第134-146页 |
| 1 材料 | 第134-135页 |
| ·试验动物及处理 | 第135页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第135页 |
| 2 方法 | 第135-137页 |
| ·采样前的准备 | 第135页 |
| ·器皿处理与载玻片包被 | 第135页 |
| ·样品的采集及处理 | 第135页 |
| ·铅镉对大鼠肾皮质MT诱导表达的免疫组化试验 | 第135-136页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第136页 |
| ·大鼠肾皮质MT-1和MT-2 mRNA表达的FQ-PCR分析 | 第136-137页 |
| ·引物设计 | 第136页 |
| ·cDNA 制备 | 第136页 |
| ·荧光定量PCR 反应 | 第136-137页 |
| ·比较 Ct 法的相对定量 | 第137页 |
| ·数据分析 | 第137页 |
| 3 结果 | 第137-140页 |
| ·免疫组化法检测铅、镉诱导大鼠肾皮质金属硫蛋白的表达 | 第137-138页 |
| ·铅镉暴露对肾皮质MT-1和MT-2基因表达的影响 | 第138-140页 |
| ·总RNA 检测及熔解曲线分析 | 第138-139页 |
| ·MT-1 和MT-2 基因表达定量分析结果 | 第139-140页 |
| 4 讨论 | 第140-143页 |
| 参考文献 | 第143-146页 |
| 第三部分 体外试验研究 | 第146-212页 |
| 第一章 大鼠肾小管上皮细胞原代培养模型的建立 | 第147-156页 |
| 1 材料 | 第147-148页 |
| ·试验动物 | 第147页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第147-148页 |
| 2 方法 | 第148-150页 |
| ·溶液的配制 | 第148页 |
| ·近端肾小管上皮细胞的培养 | 第148-149页 |
| ·肾小管节段的分离 | 第148-149页 |
| ·肾小管节段消化及原代培养 | 第149页 |
| ·原代细胞生长曲线测定 | 第149页 |
| ·细胞鉴定 | 第149-150页 |
| ·细胞爬片的制备 | 第149页 |
| ·免疫组化染色 | 第149页 |
| ·碱性磷酸酶化学染色 | 第149-150页 |
| 3 结果 | 第150-152页 |
| ·肾小管节段的贴壁和肾小管上皮细胞的生长状况 | 第150-151页 |
| ·肾小管上皮细胞鉴定 | 第151-152页 |
| 4 讨论 | 第152-154页 |
| ·肾小管上皮细胞原代培养技术要点 | 第153页 |
| ·近端肾小管上皮细胞的鉴定 | 第153-154页 |
| 参考文献 | 第154-156页 |
| 第二章 铅镉联合对肾小管上皮细胞的毒性损伤作用 | 第156-180页 |
| 1 材料 | 第156页 |
| ·试验动物 | 第156页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第156页 |
| 2 方法 | 第156-158页 |
| ·肾小管上皮细胞的培养 | 第156页 |
| ·铅镉单独或联合染毒的作用浓度筛选 | 第156-157页 |
| ·cck-8 还原法测定细胞存活率 | 第157页 |
| ·流式细胞仪测定细胞凋亡率和坏死率 | 第157-158页 |
| ·乳酸脱氢酶(LDH)释放率的测定 | 第158页 |
| ·肾小管上皮细胞凋亡的形态学观察 | 第158页 |
| ·数据分析 | 第158页 |
| 3 结果 | 第158-173页 |
| ·铅镉浓度筛选结果及各组的作用浓度 | 第159-160页 |
| ·铅镉染毒对肾小管上皮细胞存活率的影响 | 第160-161页 |
| ·NAC对铅镉染毒12h所致肾小管上皮细胞死亡的保护效应 | 第161-165页 |
| ·铅镉染毒12h对肾小管上皮细胞凋亡率、坏死率的影响及NAC的保护效应 | 第165-167页 |
| ·铅镉染毒12h对肾小管上皮细胞LDH释放率的影响及NAC的保护效应 | 第167-169页 |
| ·铅镉染毒12h对肾小管上皮细胞凋亡形态学观察及凋亡率统计 | 第169-173页 |
| 4 讨论 | 第173-176页 |
| ·铅镉联合对肾小管上皮细胞的毒性效应 | 第173-174页 |
| ·氧化应激与细胞凋亡在铅镉联合所致细胞死亡过程中的作用 | 第174-176页 |
| 参考文献 | 第176-180页 |
| 第三章 铅镉联合对肾小管上皮细胞氧化损伤的研究 | 第180-194页 |
| 1 材料 | 第180页 |
| ·试验动物 | 第180页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第180页 |
| 2 方法 | 第180-182页 |
| ·肾小管上皮细胞的培养 | 第181页 |
| ·细胞内抗氧化酶活性、GSH 及MDA 含量的测定 | 第181页 |
| ·流式细胞仪测定细胞内活性氧(ROS) | 第181页 |
| ·肾小管上皮细胞线粒体膜电位的检测 | 第181-182页 |
| ·数据分析 | 第182页 |
| 3 结果 | 第182-187页 |
| ·铅镉暴露对肾小管上皮细胞细胞内抗氧化酶活性的影响 | 第182-184页 |
| ·铅镉暴露对肾小管上皮细胞细胞内MDA与GSH含量的影响 | 第184-185页 |
| ·铅镉暴露对肾小管上皮细胞细胞内活性氧与线粒体膜电位(ΔΨ)的影响 | 第185-187页 |
| 4 讨论 | 第187-191页 |
| ·铅镉联合作用对大鼠肾小管上皮细胞的脂质过氧化反应 | 第188-189页 |
| ·线粒体膜电位降低在铅镉联合所致细胞氧化损伤过程中的作用 | 第189-191页 |
| 参考文献 | 第191-194页 |
| 第四章 细胞内环境稳态在铅镉所致肾小管上皮细胞损伤过程中的作用 | 第194-212页 |
| 1 材料 | 第194-195页 |
| ·试验动物 | 第194页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第194-195页 |
| 2 方法 | 第195-196页 |
| ·肾小管上皮细胞的培养 | 第195页 |
| ·细胞内GSH 含量的测定 | 第195页 |
| ·流式细胞仪测定细胞内钙离子水平([Ca~(2+)]_i) | 第195页 |
| ·流式细胞仪测定细胞内pH | 第195-196页 |
| ·细胞膜标志酶(ATPases)活性的测定 | 第196页 |
| ·数据分析 | 第196页 |
| 3 结果 | 第196-205页 |
| ·铅镉暴露12h对肾小管上皮细胞胞内GSH含量的影响及NAC的保护效应 | 第196-199页 |
| ·铅镉暴露对肾小管上皮细胞胞内钙离子水平([Ca~(2+)]_i)的影响及NAC的保护效应 | 第199-202页 |
| ·铅镉染毒对肾小管上皮细胞膜ATP 酶活性的影响 | 第202-205页 |
| ·铅镉染毒对肾小管上皮细胞胞内pH的影响 | 第205页 |
| 4 讨论 | 第205-208页 |
| ·胞内钙超载在铅镉所致肾小管上皮细胞凋亡性死亡过程中的作用 | 第206-207页 |
| ·胞内酸化在铅镉所致肾小管上皮细胞凋亡性死亡过程中的作用 | 第207-208页 |
| 参考文献 | 第208-212页 |
| 结论 | 第212-213页 |
| 附图 | 第213-218页 |
| 攻读博士学位期间发表论文 | 第218-219页 |
| 致谢 | 第219页 |
