| 内容提要 | 第1-7页 |
| 第一章 前言 | 第7-18页 |
| ·极端微生物及嗜热古菌 | 第7-10页 |
| ·蛋白酶 | 第10-13页 |
| ·蛋白酶定义和分类 | 第10-12页 |
| ·蛋白酶在工业中的应用 | 第12-13页 |
| ·超嗜热蛋白酶的应用 | 第13页 |
| ·DJ-1/ThiJ/PfpI 超家族简介 | 第13-16页 |
| ·DJ-1/ThiJ/pfpI 超家族 | 第13-14页 |
| ·PfpI 蛋白酶家族 | 第14-16页 |
| ·酶分子改造 | 第16-17页 |
| ·酶分子的理性设计 | 第16页 |
| ·蛋白质工程改造蛋白酶 | 第16-17页 |
| ·立题依据 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-30页 |
| ·引言 | 第18页 |
| ·主要实验仪器 | 第18-19页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·菌种与质粒 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·培养基 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-30页 |
| ·Pyrococcus horikoshii 的培养 | 第21页 |
| ·PhpI 基因的克隆 | 第21-24页 |
| ·突变体Y120P 的构建 | 第24-25页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第25页 |
| ·目的蛋白的提取、纯化及鉴定 | 第25-27页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第27页 |
| ·蛋白酶活力的测定 | 第27-29页 |
| ·生物信息学软件 | 第29-30页 |
| 第三章 蛋白酶PhpI 的克隆表达及性质表征 | 第30-42页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·基因克隆 | 第30-31页 |
| ·Pyrococcus horikoshii 基因组提取 | 第30-31页 |
| ·PhpI 基因PCR 产物的鉴定及回收 | 第31页 |
| ·克隆结果鉴定 | 第31页 |
| ·蛋白酶PhpI 的纯化及鉴定 | 第31-32页 |
| ·蛋白酶PhpI 的酶学性质表征 | 第32-40页 |
| ·最适温度以及热稳定性测定 | 第32-33页 |
| ·最适pH 值测定 | 第33-34页 |
| ·底物特异性测定 | 第34-36页 |
| ·氨基肽酶及内切酶底物动力学测定 | 第36页 |
| ·金属离子以及抑制剂对蛋白酶PhpI 催化活性的影响 | 第36-38页 |
| ·有机溶剂对蛋白酶PhpI 催化活性的影响 | 第38-39页 |
| ·表面活性剂对蛋白酶PhpI 催化活性的影响 | 第39-40页 |
| ·小结 | 第40-42页 |
| 第四章 突变体Y120P 对酶学性质的影响 | 第42-52页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·突变位点的确定 | 第42-44页 |
| ·突变体Y120P 的构建及表达纯化 | 第44页 |
| ·突变体Y120P 的最适温度及最适pH | 第44-47页 |
| ·突变体Y120P 的底物特异性 | 第47-49页 |
| ·突变体Y120P 的催化活性 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 中文摘要 | 第57-59页 |
| Abstract | 第59-61页 |
