| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 前言 | 第13-17页 |
| 技术路线 | 第17-21页 |
| 第一章 急性肺损伤和肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤对FoxA1 mRNA和蛋白质表达的影响 | 第21-41页 |
| ·材料与方法 | 第21-26页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·动物 | 第21页 |
| ·细胞株 | 第21-22页 |
| ·抗体 | 第22页 |
| ·其它主要试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·引物 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-26页 |
| ·大鼠急性肺损伤模型制备 | 第23页 |
| ·肺组织损伤评分 | 第23-24页 |
| ·肺组织湿/干重比例测定 | 第24页 |
| ·SD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞分离及培养 | 第24页 |
| ·细胞培养及处理 | 第24页 |
| ·组织和细胞总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) | 第25-26页 |
| ·免疫印迹分析(Western blot) | 第26页 |
| ·统计学分析 | 第26页 |
| ·结果 | 第26-39页 |
| ·急性肺损伤大鼠血气分析、肺组织形态学变化 | 第26-29页 |
| ·急性肺损伤SD大鼠肺组织损伤程度及肺湿/干重比例 | 第29-31页 |
| ·急性肺损伤时FoxA1在SD大鼠肺组织中的表达 | 第31-33页 |
| ·多种损伤因素对原代分离培养的SD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞FoxA1表达的影响 | 第33-36页 |
| ·多种损伤因素对A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞FoxA1表达的影响 | 第36-39页 |
| ·分析与讨论 | 第39-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第二章 FoxA1对急性肺损伤中肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响 | 第41-57页 |
| ·材料和方法 | 第41-44页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·主要材料和试剂 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·引物及寡核苷酸序列 | 第42页 |
| ·其它材料同第一部分 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-44页 |
| ·细胞培养及处理 | 第42-43页 |
| ·caspase3活性检测 | 第43页 |
| ·TUNNEL和MNF-116双标检测肺组织肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡 | 第43页 |
| ·pcDNA3.1-FoxA1真核表达质粒构建 | 第43-44页 |
| ·脂质体介导的瞬时转染 | 第44页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第44页 |
| ·其它方法同第一部分 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-55页 |
| ·急性肺损伤SD大鼠肺组织caspase-3活性的变化 | 第44-46页 |
| ·急性肺损伤对SD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响 | 第46-47页 |
| ·H_2O_2对肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响 | 第47-49页 |
| ·H_2O_2诱导原代分离培养的SD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡 | 第47-48页 |
| ·H_2O_2诱导A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡 | 第48-49页 |
| ·pcDNA3.1-FoxA1重组质粒的构建 | 第49页 |
| ·FoxA1过表达的A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞的鉴定 | 第49-50页 |
| ·内源性FoxA1的表达抑制 | 第50-52页 |
| ·FoxA1反义寡核苷酸对A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞内源性FoxA1 mRNA表达的影响 | 第50-51页 |
| ·FoxA1反义寡核苷酸对A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞内源性FoxA1蛋白表达的影响 | 第51-52页 |
| ·FoxA1对H_2O_2诱导的A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响 | 第52-55页 |
| ·FoxA1过表达对H_2O_2诱导的A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响 | 第52-53页 |
| ·FoxA1内源性表达抑制对H_2O_2诱导的A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响 | 第53-55页 |
| ·分析与讨论 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第三章 FoxA1对凋亡相关基因bcl2和UCP2表达的影响及其机制探讨 | 第57-82页 |
| ·材料和方法 | 第57-64页 |
| ·材料 | 第57-60页 |
| ·主要材料和试剂 | 第57-58页 |
| ·主要仪器 | 第58页 |
| ·引物及寡核苷酸序列 | 第58-60页 |
| ·方法 | 第60-64页 |
| ·细胞培养及处理 | 第60页 |
| ·免疫印迹分析(Western blot) | 第60-61页 |
| ·生物信息学数据分析 | 第61页 |
| ·质粒构建 | 第61-62页 |
| ·脂质体介导的瞬时转染 | 第62-63页 |
| ·细胞核蛋白的提取 | 第63页 |
| ·凝胶电泳迁移率分析(EMSA) | 第63页 |
| ·染色质免疫共沉淀分析(ChIP) | 第63-64页 |
| ·双荧光素酶报告基因分析 | 第64页 |
| ·其他材料方法同前 | 第64页 |
| ·结果 | 第64-79页 |
| ·启动子区含有FoxA1结合元件的细胞凋亡相关基因的生物信息学分析 | 第64-65页 |
| ·FoxA1对A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞中bcl2表达的影响 | 第65-69页 |
| ·FoxA1过表达对A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞中bcl2表达的影响 | 第65-67页 |
| ·内源性FoxA1表达抑制对A549人肺泡Ⅱ型上皮bcl2表达的影响 | 第67-69页 |
| ·FoxA1对A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞中UCP2表达的影响 | 第69-72页 |
| ·FoxA1过表达对A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞中UCP2表达的影响 | 第69-71页 |
| ·内源性FoxA1表达抑制对UCP2表达的影响 | 第71-72页 |
| ·FoxA1调控bcl2和UCP2表达的机制 | 第72-79页 |
| ·人bcl2和UCP2基因启动子的生物信息学分析 | 第72-73页 |
| ·FoxA1与bcl2和UCP2基因启动子区FoxA1元件的结合 | 第73-76页 |
| ·FoxA1对bcl2和UCP2基因启动子转录活性的影响 | 第76-79页 |
| ·分析与讨论 | 第79-81页 |
| ·小结 | 第81-82页 |
| 讨论 | 第82-84页 |
| 总结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-95页 |
| 综述 | 第95-109页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果目录 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
