| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 1 引言 | 第13-26页 |
| ·马铃薯Y 病毒属的基因组结构及各蛋白功能 | 第13-14页 |
| ·RNA 介导的病毒抗性 | 第14-17页 |
| ·RNA 介导的病毒抗性的提出 | 第14-15页 |
| ·RNA 介导的病毒抗性的特点 | 第15-16页 |
| ·RNA 介导的病毒抗性是转录后基因沉默的结果 | 第16-17页 |
| ·RNA 干扰(RNAi) | 第17-24页 |
| ·RNAi 的特征 | 第17-19页 |
| ·RNAi 的作用机制 | 第19-21页 |
| ·hpRNA 与RNAi | 第21-24页 |
| ·本研究的立题依据和主要研究内容 | 第24-26页 |
| ·立题依据 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-44页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·毒源 | 第26页 |
| ·供试植物 | 第26页 |
| ·菌株、质粒 | 第26页 |
| ·常用缓冲液及培养基的配制 | 第26页 |
| ·常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-44页 |
| ·不同目的基因片段的获得 | 第26-27页 |
| ·RT-PCR 克隆马铃薯Y 病毒基因组不同区段cDNA | 第27-30页 |
| ·不同目的片段的获得 | 第30-31页 |
| ·中间载体pROKⅡ-P1-400、pROKⅡ- HC-Pro-400、pROKⅡ-P3-400 和pROKⅡ-CI-400 的构建 | 第31-34页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第34-36页 |
| ·目的基因向烟草中的转化及植株再生 | 第36-37页 |
| ·植物总DNA 的提取（CTAB 法）及PCR 检测 | 第37-38页 |
| ·转基因植株的抗病性鉴定及ELISA 检测 | 第38页 |
| ·转基因植株总 RNA 的提取及 Northern blot 分析 | 第38-42页 |
| ·转基因植株siRNA 的提取及siRNA 的Northern blot 分析 | 第42-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-59页 |
| ·RT-PCR 扩增 P1、HC-Pro、P3 和 CI 基因 | 第44-46页 |
| ·目的片段的扩增和酶切 | 第45-46页 |
| ·质粒DNA 酶切 | 第46页 |
| ·重组载体的构建 | 第46-51页 |
| ·重组中间载体pROKⅡ-P1-400、pROKⅡ- HC-Pro-400 、pROKⅡ- P3-400 、pROKⅡ-CI-400 的菌落PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组中间载体 pROKⅡ-P1-400、pROKⅡ-HC-Pro-400、pROKⅡ- P3-400 、pROKⅡ-CI-400 质粒的酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·植物表达载体pROKⅡ-P1、pROKⅡ- HC-Pro 、pROKⅡ-P3、pROKⅡ-CI 的菌落PCR 鉴定 | 第48-50页 |
| ·植物表达载体pROKⅡ-P1、pROKⅡ- HC-Pro 、pROKⅡ-P3、pROKⅡ-CI 的酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·转化植株的获得 | 第51-52页 |
| ·转化植株的PCR 检测 | 第52-54页 |
| ·转基因植株的抗病性分析 | 第54-56页 |
| ·转基因植株的 Northern blot 分析 | 第56-57页 |
| ·转基因植株 siRNA 的 Northern blot 分析 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-76页 |
| 附录Ⅰ 常用缓冲液及培养基的配制 | 第76-81页 |
| 附录Ⅱ常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第81-82页 |
| 附录 III 质粒图谱 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
