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融合蛋白CTP-SOD在毕赤酵母中的表达、纯化及抗氧化能力

摘要第1-7页
Abstract第7-9页
第1章 文献综述第9-19页
   ·氧自由基和超氧化物歧化酶第9-11页
     ·氧自由基的产生和危害第9-10页
     ·超氧化物歧化酶第10-11页
   ·蛋白转导肽研究进展第11-16页
     ·蛋白转导域第11-12页
     ·TAT转运机制研究进展第12-15页
     ·应用及前景第15-16页
   ·巴斯德毕赤酵母表达系统第16-19页
第2章 绪论第19-21页
   ·研究目的与意义第19页
   ·研究内容第19-21页
第3章 实验材料及仪器第21-23页
   ·实验材料第21-22页
     ·菌株和质粒第21页
     ·主要试剂第21页
     ·引物及测序第21页
     ·主要试剂第21-22页
     ·其他第22页
   ·主要仪器第22-23页
第4章 实验方法第23-39页
   ·取材及样品处理第23页
   ·总RNA提取及反转录第23-24页
     ·总RNA提取第23页
     ·RNA完整性鉴定第23-24页
     ·浓度测定第24页
   ·RT-PCR扩增CTP-SOD基因第24-25页
     ·引物设计第24页
     ·cDNA第一条链的合成第24-25页
     ·CTP-SOD基因扩增第25页
   ·重组质粒CTP-SOD/pPIC9K的构建第25-26页
     ·小量制备pPIC9K质粒第25-26页
     ·质粒和基因的酶切与连接第26页
   ·CTP-SOD/pPIC9K大肠杆菌克隆菌株的构建第26-28页
     ·感受态E.coli Top10细胞的制备第26-27页
     ·重组质粒转化E.coli Top10第27页
     ·菌落PCR鉴定阳性克隆第27-28页
     ·DNA测序鉴定重组质粒第28页
   ·CTP-SOD毕赤赤酵母表达菌株的构建第28-31页
     ·大量制备CTP-SOD/pPIC9K质粒第28-29页
     ·CTP-SOD/pPIC9K质粒线性化第29页
     ·毕赤酵母GS115感受态细胞制备第29-30页
     ·电击法转化酵母细胞第30页
     ·菌落PCR鉴定阳性重组子第30页
     ·小量表达筛选可表达克隆第30-31页
     ·诱导时间与表达量关系的确定第31页
   ·Western blotting分析第31-33页
     ·试剂配制第31-32页
     ·转膜第32页
     ·膜的封闭和抗体孵育第32-33页
     ·增强化学发光法(ECL)显色第33页
   ·重组蛋白的制备第33-35页
     ·三角瓶大量发酵第33页
     ·蛋白盐析第33页
     ·透析除盐及纯化第33-34页
     ·比活测定第34-35页
   ·重组蛋白的抗氧化能力第35-39页
     ·试剂的配制第36页
     ·HeLa细胞培养第36-37页
     ·HeLa细胞氧化损伤模型建立第37-38页
     ·CTP-SOD对氧化胁迫下细胞的保护作用第38-39页
第5章 实验结果与讨论第39-48页
   ·人总RNA提取第39页
   ·CTP-SOD基因扩增第39页
   ·CTP-SOD基因和pPIC9K质粒的双酶切第39-40页
   ·CTP-SOD/pPIC9K重组质粒构建第40-42页
   ·CTP-SOD酵母工程菌的构建第42-43页
     ·菌落PCR鉴定P.pastoris阳性重组子第42页
     ·SDS-PAGE筛选可表达重组P.pastoris菌株第42-43页
     ·诱导时间和表达量关系的确定第43页
   ·蛋白盐析条件第43-44页
   ·蛋白纯化及Western blotting鉴定第44-45页
   ·CTP-SOD对氧化胁迫下细胞的保护作用第45-46页
   ·讨论第46-48页
参考文献第48-54页
致谢第54-55页
在学期间发表论文第55页

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