中文摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-14页 |
第一章 前言 | 第14-17页 |
第二章 MRSA耐药表型和SCCmec基因分型 | 第17-40页 |
1. 材料 | 第17-19页 |
·菌株来源 | 第17-18页 |
·实验菌株 | 第17页 |
·质控菌株 | 第17-18页 |
·阳性对照菌 | 第18页 |
·试剂 | 第18-19页 |
·细菌培养基 | 第18页 |
·抗生素 | 第18页 |
·引物和PCR试剂 | 第18-19页 |
·仪器 | 第19页 |
2. 方法 | 第19-25页 |
·试剂的配制 | 第19-20页 |
·MH肉汤配制 | 第19-20页 |
·TE缓冲液 | 第20页 |
·TAE电泳缓冲液 | 第20页 |
·溴化乙锭(EB)贮存液 | 第20页 |
·PCR扩增mecA基因鉴定MRSA | 第20-22页 |
·基因DNA模板的提取 | 第20-22页 |
·PCR扩增mecA基因 | 第22页 |
·最低抑菌浓度测定(MIC) | 第22-24页 |
·抗菌药物的配制 | 第22页 |
·含药琼脂的制备 | 第22-23页 |
·菌悬液的制备 | 第23页 |
·接种 | 第23-24页 |
·多重PCR扩增检测SCCmec分子分型 | 第24-25页 |
·多重PCR反应体系及条件 | 第24页 |
·琼脂糖电泳 | 第24-25页 |
3. 结果 | 第25-28页 |
·MRSA的菌株鉴定 | 第25-26页 |
·抗生素对MRSA的MIC值及耐药率 | 第26页 |
·92 株MRSA的SCCmec 分型 | 第26-28页 |
4. 讨论 | 第28-34页 |
参考文献 | 第34-40页 |
第三章 黄芩素与β-内酰胺类抗生素对MRSA的协同抗菌作用机制研究 | 第40-94页 |
1. 材料 | 第40-42页 |
·菌株来源 | 第40-41页 |
·实验菌株 | 第40-41页 |
·试剂 | 第41页 |
·仪器 | 第41-42页 |
2. 方法 | 第42-62页 |
·微量稀释法测定单用黄芩素的最低抑菌浓度(MIC) | 第42-43页 |
·细菌准备 | 第42页 |
·黄芩素溶液的配制 | 第42-43页 |
·黄芩素的 MIC 值测定 | 第43页 |
·微量棋盘稀释法测定黄芩素与β-内酰胺类抗生素的协同抗菌作用 | 第43-44页 |
·AFFX原核表达谱芯片测定黄芩素对MRSA全基因组表达影响 | 第44-50页 |
·样品的准备 | 第44页 |
·RNA的提取 | 第44-45页 |
·样品总RNA质量及完整性检测 | 第45页 |
·RNA反转录为cDNA | 第45-47页 |
·cDNA纯化、定量 | 第47页 |
·cDNA片段化 | 第47-48页 |
·末端标记 | 第48-49页 |
·金黄色葡萄球菌基因芯片杂交 | 第49页 |
·芯片清洗染色与扫描 | 第49-50页 |
·Real-time PCR验证基因芯片结果 | 第50-52页 |
·黄芩素对PBP2a蛋白表达的影响 | 第52-58页 |
·主要试剂的配制 | 第52-56页 |
·MRSA总蛋白的抽提 | 第56-57页 |
·蛋白印迹法(Western-blot)检测PBP2a的表达变化 | 第57页 |
·荧光凝胶成像检测黄芩素对青霉素结合蛋白的影响 | 第57-58页 |
·高效液相色谱法(HPLC)测定黄芩素对金葡菌摄取头孢唑啉的影响 | 第58-60页 |
·色谱条件 | 第58页 |
·配制液体 | 第58-59页 |
·样品处理 | 第59-60页 |
·标准曲线制作 | 第60页 |
·回收率测定 | 第60页 |
·精密度测定 | 第60页 |
·黄芩素对MRSA自溶酶谱及活性的影响 | 第60-61页 |
·自溶酶谱及活性分析 | 第60-61页 |
·黄芩素对金葡菌β-内酰胺酶活性的影响 | 第61-62页 |
·配制nitrocefin溶液 | 第61页 |
·β-内酰胺酶的制备 | 第61-62页 |
·比较黄芩素和三唑巴坦对β-内酰胺酶的抑制作用 | 第62页 |
3. 结果 | 第62-79页 |
·黄芩素与β-内酰胺类抗生素的协同抗菌作用 | 第62-65页 |
·基因芯片检测黄芩素对MRSA全基因组表达影响 | 第65-72页 |
·样品总RNA质量及完整性检测结果 | 第65页 |
·差异表达基因分析结果 | 第65-72页 |
·Real-time PCR(RT-PCR)验证基因芯片结果 | 第72-73页 |
·蛋白印迹法(Western-blot)检测PBP2a的表达变化 | 第73-74页 |
·荧光凝胶成像检测黄芩素对PBPs的表达及活性的影响 | 第74-75页 |
·HPLC测定黄芩素对金葡菌摄取头孢唑啉的影响 | 第75-78页 |
·头孢唑啉色谱图及标准曲线,回收率和日内精密度 | 第75-77页 |
·MRSA和ATCC菌体内头孢唑啉的浓度 | 第77-78页 |
·黄芩素对MRSA自溶酶谱及活性的影响 | 第78-79页 |
·黄芩素对β-内酰胺酶活性的影响 | 第79页 |
4. 讨论 | 第79-88页 |
参考文献 | 第88-94页 |
结论 | 第94-95页 |
综述 | 第95-106页 |
致谢 | 第106-107页 |
攻读博士学位期间发表的论文 | 第107页 |