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黄芩素与β-内酰胺类抗生素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的协同抗菌作用研究

中文摘要第1-7页
ABSTRACT第7-14页
第一章 前言第14-17页
第二章 MRSA耐药表型和SCCmec基因分型第17-40页
 1. 材料第17-19页
   ·菌株来源第17-18页
     ·实验菌株第17页
     ·质控菌株第17-18页
     ·阳性对照菌第18页
   ·试剂第18-19页
     ·细菌培养基第18页
     ·抗生素第18页
     ·引物和PCR试剂第18-19页
   ·仪器第19页
 2. 方法第19-25页
   ·试剂的配制第19-20页
     ·MH肉汤配制第19-20页
     ·TE缓冲液第20页
     ·TAE电泳缓冲液第20页
     ·溴化乙锭(EB)贮存液第20页
   ·PCR扩增mecA基因鉴定MRSA第20-22页
     ·基因DNA模板的提取第20-22页
     ·PCR扩增mecA基因第22页
   ·最低抑菌浓度测定(MIC)第22-24页
     ·抗菌药物的配制第22页
     ·含药琼脂的制备第22-23页
     ·菌悬液的制备第23页
     ·接种第23-24页
   ·多重PCR扩增检测SCCmec分子分型第24-25页
     ·多重PCR反应体系及条件第24页
     ·琼脂糖电泳第24-25页
 3. 结果第25-28页
   ·MRSA的菌株鉴定第25-26页
   ·抗生素对MRSA的MIC值及耐药率第26页
   ·92 株MRSA的SCCmec 分型第26-28页
 4. 讨论第28-34页
 参考文献第34-40页
第三章 黄芩素与β-内酰胺类抗生素对MRSA的协同抗菌作用机制研究第40-94页
 1. 材料第40-42页
   ·菌株来源第40-41页
     ·实验菌株第40-41页
   ·试剂第41页
   ·仪器第41-42页
 2. 方法第42-62页
     ·微量稀释法测定单用黄芩素的最低抑菌浓度(MIC)第42-43页
     ·细菌准备第42页
     ·黄芩素溶液的配制第42-43页
     ·黄芩素的 MIC 值测定第43页
   ·微量棋盘稀释法测定黄芩素与β-内酰胺类抗生素的协同抗菌作用第43-44页
   ·AFFX原核表达谱芯片测定黄芩素对MRSA全基因组表达影响第44-50页
     ·样品的准备第44页
     ·RNA的提取第44-45页
     ·样品总RNA质量及完整性检测第45页
     ·RNA反转录为cDNA第45-47页
     ·cDNA纯化、定量第47页
     ·cDNA片段化第47-48页
     ·末端标记第48-49页
     ·金黄色葡萄球菌基因芯片杂交第49页
     ·芯片清洗染色与扫描第49-50页
   ·Real-time PCR验证基因芯片结果第50-52页
   ·黄芩素对PBP2a蛋白表达的影响第52-58页
     ·主要试剂的配制第52-56页
     ·MRSA总蛋白的抽提第56-57页
     ·蛋白印迹法(Western-blot)检测PBP2a的表达变化第57页
     ·荧光凝胶成像检测黄芩素对青霉素结合蛋白的影响第57-58页
   ·高效液相色谱法(HPLC)测定黄芩素对金葡菌摄取头孢唑啉的影响第58-60页
     ·色谱条件第58页
     ·配制液体第58-59页
     ·样品处理第59-60页
     ·标准曲线制作第60页
     ·回收率测定第60页
     ·精密度测定第60页
   ·黄芩素对MRSA自溶酶谱及活性的影响第60-61页
     ·自溶酶谱及活性分析第60-61页
   ·黄芩素对金葡菌β-内酰胺酶活性的影响第61-62页
     ·配制nitrocefin溶液第61页
     ·β-内酰胺酶的制备第61-62页
     ·比较黄芩素和三唑巴坦对β-内酰胺酶的抑制作用第62页
 3. 结果第62-79页
   ·黄芩素与β-内酰胺类抗生素的协同抗菌作用第62-65页
   ·基因芯片检测黄芩素对MRSA全基因组表达影响第65-72页
     ·样品总RNA质量及完整性检测结果第65页
     ·差异表达基因分析结果第65-72页
   ·Real-time PCR(RT-PCR)验证基因芯片结果第72-73页
   ·蛋白印迹法(Western-blot)检测PBP2a的表达变化第73-74页
   ·荧光凝胶成像检测黄芩素对PBPs的表达及活性的影响第74-75页
   ·HPLC测定黄芩素对金葡菌摄取头孢唑啉的影响第75-78页
     ·头孢唑啉色谱图及标准曲线,回收率和日内精密度第75-77页
     ·MRSA和ATCC菌体内头孢唑啉的浓度第77-78页
   ·黄芩素对MRSA自溶酶谱及活性的影响第78-79页
   ·黄芩素对β-内酰胺酶活性的影响第79页
 4. 讨论第79-88页
 参考文献第88-94页
结论第94-95页
综述第95-106页
致谢第106-107页
攻读博士学位期间发表的论文第107页

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