| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-24页 |
| ·禽流感流行及其公共卫生学意义 | 第12-15页 |
| ·禽流感的历史及流行概况 | 第12-13页 |
| ·禽流感的危害 | 第13-14页 |
| ·公共卫生学意义 | 第14-15页 |
| ·禽流感病毒免疫相关抗原研究进展 | 第15-18页 |
| ·禽流感免疫防治疫苗研究进展 | 第18-20页 |
| ·全病毒灭活疫苗 | 第18页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第18-19页 |
| ·重组活载体疫苗 | 第19页 |
| ·DNA 疫苗 | 第19-20页 |
| ·禽流感疾病检测方法研究进展 | 第20-23页 |
| ·病毒分离培养 | 第20页 |
| ·血清学检测 | 第20-22页 |
| ·分子生物学技术检测 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-37页 |
| ·试验材料 | 第24-27页 |
| ·病毒核酸物质 | 第24页 |
| ·菌种、质粒与细胞 | 第24页 |
| ·抗体制剂 | 第24页 |
| ·酶、试剂盒及主要生化试剂 | 第24页 |
| ·引物设计与合成 | 第24-25页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)主要试剂 | 第25页 |
| ·免疫印迹(Western-blot)主要试剂 | 第25页 |
| ·培养基及培养液的配制 | 第25-26页 |
| ·间接免疫荧光检测主要试剂 | 第26页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·试验方法 | 第27-37页 |
| ·禽流感病毒NA 基因的扩增 | 第27-28页 |
| ·pMD18-T-NA 阳性重组质粒的鉴定 | 第28-30页 |
| ·重组载体的构建 | 第30-31页 |
| ·重组转移载体的鉴定 | 第31页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第31-32页 |
| ·rAcBacmid-NA 转染昆虫细胞 | 第32-33页 |
| ·重组杆状病毒的鉴定及病毒滴度的测定 | 第33-34页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第34页 |
| ·表达产物的Western blot 鉴定 | 第34-35页 |
| ·NA-IFA 检测方法的建立 | 第35-37页 |
| 3 实验结果 | 第37-46页 |
| ·AIV NA 基因的扩增结果 | 第37页 |
| ·重组质粒pMD18-T-NA 的鉴定 | 第37-38页 |
| ·pMD18-T-NA 酶切鉴定 | 第37页 |
| ·pMD18-T-NA PCR 鉴定 | 第37-38页 |
| ·AIV NA 基因序列测定结果 | 第38页 |
| ·重组载体pFastBacTMHTA-NA 的鉴定 | 第38页 |
| ·蓝白斑筛选及重组杆粒rAcBacmid-NA 的鉴定 | 第38-40页 |
| ·蓝白斑 | 第38-39页 |
| ·重组杆粒 rAcBacmid-NA 的 PCR 鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组杆粒rAcBacmid-NA 感染昆虫细胞 | 第40页 |
| ·重组杆状病毒的鉴定及病毒滴度的测定 | 第40-41页 |
| ·重组杆状病毒的PCR 鉴定 | 第40页 |
| ·重组杆状病毒滴度的测定 | 第40-41页 |
| ·重组杆状病毒在昆虫细胞中的表达及表达产物的检测 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE 检测表达产物 | 第41页 |
| ·Western-blot 结果分析 | 第41页 |
| ·NA-IFA 检测方法的建立 | 第41-46页 |
| ·最佳 MOI 值以及最佳接毒时间的确定 | 第41-42页 |
| ·结果细胞固定剂的确定 | 第42页 |
| ·NA-IFA 鉴别诊断的结果 | 第42页 |
| ·NA-IFA 诊断特异性与敏感性检测 | 第42页 |
| ·NA-IFA 重复性试验 | 第42-44页 |
| ·NA-IFA 检测其他病毒参考血清的特异性试验 | 第44页 |
| ·NA-IFA 试剂盒保存期试验 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-49页 |
| ·基于DIVA 诊断策略构建H5N1 亚型NA 重组蛋白的考虑因素 | 第46页 |
| ·NA 重组蛋白作为鉴别诊断抗原在血清抗体检测中的作用 | 第46-47页 |
| ·以NA 重组蛋白作为鉴别诊断抗原的间接免疫荧光(IFA)方法的初步建立 | 第47-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-60页 |
| 附录 | 第60-62页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第62页 |
