| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-24页 |
| ·橡胶生物合成分子生物学研究进展 | 第9-12页 |
| ·橡胶生物合成分子生物学研究现状与不足 | 第9-10页 |
| ·激素对橡胶生物合成的调控及其分子生物学研究现状与不足 | 第10-11页 |
| ·橡胶转录因子研究现状与分析 | 第11页 |
| ·植物锌指蛋白与橡胶胶乳产生的关联性分析 | 第11-12页 |
| ·差异表达基因的筛选技术 | 第12-16页 |
| ·mRNA差异显示技术(DDRT-PCR) | 第12页 |
| ·RNA随机引物聚合酶链式反应(RAP-PCR) | 第12-13页 |
| ·代表性差异分析(cDNA-RDA) | 第13页 |
| ·抑制消减杂交(SSH) | 第13-15页 |
| ·cDNA微阵列在检测表达差异基因中的应用 | 第15页 |
| ·基因表达序列分析(SAGE) | 第15-16页 |
| ·应用拟南芥cDNA微阵列芯片研究非模式植物的转录谱 | 第16页 |
| ·锌指蛋白的研究进展 | 第16-22页 |
| ·锌指蛋白的结构 | 第17-18页 |
| ·锌指蛋白的分类 | 第18页 |
| ·锌指蛋白转录因子的调控机理 | 第18-19页 |
| ·与逆境胁迫相关的植物锌指蛋白 | 第19-22页 |
| ·与盐胁迫有关的锌指蛋白 | 第20页 |
| ·与冷胁迫有关的锌指蛋白 | 第20-21页 |
| ·与干旱胁迫有关的锌指蛋白 | 第21页 |
| ·与氧胁迫有关的锌指蛋白 | 第21页 |
| ·与强光胁迫有关的锌指蛋白 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-34页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·植物材料来源 | 第24页 |
| ·菌株和质粒 | 第24页 |
| ·生化试剂 | 第24页 |
| ·质粒载体 | 第24页 |
| ·工具酶及分子量标准 | 第24页 |
| ·试剂盒 | 第24页 |
| ·主要化学试剂 | 第24页 |
| ·芯片选择 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·引物列表 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-34页 |
| ·利用cDNA微阵列筛选差异表达基因 | 第25-29页 |
| ·胶乳RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·CTAB结合TRNzol~-A~+提取叶片总RNA | 第26页 |
| ·RNA纯化 | 第26-27页 |
| ·RNA的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第27页 |
| ·总RNA的浓度检测 | 第27页 |
| ·对样品RNA进行荧光标记(晶芯~(?)cRNA扩增标记试剂盒) | 第27页 |
| ·杂交与清洗 | 第27-28页 |
| ·芯片扫描 | 第28页 |
| ·芯片图像的采集与数据分析 | 第28-29页 |
| ·生物信息学分析 | 第29页 |
| ·橡胶C3HC4型锌指蛋白基因的克隆 | 第29-32页 |
| ·橡胶基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第30页 |
| ·PCR | 第30页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第30-31页 |
| ·载体连接 | 第31页 |
| ·重组质粒的转化 | 第31页 |
| ·菌落PCR检测 | 第31-32页 |
| ·激素处理后的表达分析 | 第32-34页 |
| ·实验材料处理 | 第32页 |
| ·胶乳RNA的提取 | 第32页 |
| ·RT-PCR | 第32页 |
| ·Real-Time PCR | 第32-34页 |
| 3. 结果与分析 | 第34-49页 |
| ·胶乳特异表达基因的获得 | 第34-37页 |
| ·胶乳RNA和叶片RNA的提取 | 第34页 |
| ·基因芯片表达谱 | 第34-35页 |
| ·芯片杂交结果 | 第35-36页 |
| ·芯片结果分析 | 第36-37页 |
| ·四个锌指蛋白基因的克隆 | 第37-41页 |
| ·基因组DNA的质量检测 | 第38-39页 |
| ·基因克隆 | 第39-40页 |
| ·内含子分析 | 第40-41页 |
| ·四个锌指蛋白基因在激素刺激下的表达差异分析 | 第41-45页 |
| ·RNA质量检测 | 第41-42页 |
| ·real-time PCR结果 | 第42-45页 |
| ·锌指蛋白基因与橡胶转移酶基因的关联性分析 | 第45-49页 |
| 4. 讨论 | 第49-55页 |
| ·微阵列杂交种关键技术问题及解决方法 | 第49-51页 |
| ·29k Aabidopsis Genome Array芯片说明 | 第49页 |
| ·芯片质量控制 | 第49-50页 |
| ·对弱杂交信号的处理 | 第50页 |
| ·芯片假阳性问题的处理 | 第50-51页 |
| ·微阵列杂交结果对研究橡胶代谢合成途径的价值 | 第51页 |
| ·橡胶DNA、RNA的提取 | 第51-52页 |
| ·关于荧光定量PCR的实验 | 第52-53页 |
| ·cDNA质量的检测 | 第53页 |
| ·关于激素作用下锌指蛋白的功能 | 第53-55页 |
| 5. 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 缩略词表 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
