| 缩略词 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 PR流行病学 | 第12-14页 |
| 1.2.1 伪狂犬病流行传播特点 | 第12-13页 |
| 1.2.2 PR的临床症状 | 第13页 |
| 1.2.3 PR的防控 | 第13-14页 |
| 1.3 PRV基本病原特性 | 第14-16页 |
| 1.3.1 伪狂犬病病毒的形态结构 | 第14-15页 |
| 1.3.2 伪狂犬病病毒的理化特性 | 第15页 |
| 1.3.3 伪狂犬病病毒的致病性 | 第15-16页 |
| 1.4 伪狂犬病病毒的分子生物学特性 | 第16-18页 |
| 1.4.1 伪狂犬病病毒基因组结构 | 第16页 |
| 1.4.2 伪狂犬病病毒的主要结构蛋白和功能 | 第16-18页 |
| 1.5 PR的诊断方法 | 第18-21页 |
| 1.5.1 PRV的分离 | 第18页 |
| 1.5.2 胶体金免疫层析技术 | 第18-19页 |
| 1.5.3 聚合酶链式反应 | 第19页 |
| 1.5.4 动物接种试验 | 第19页 |
| 1.5.5 间接免疫荧光试验 | 第19-20页 |
| 1.5.6 酶联免疫吸附试验 | 第20-21页 |
| 1.6 伪狂犬病病毒疫苗的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.7 研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 狐伪狂犬病病毒的分离鉴定 | 第24-39页 |
| 2.1 试验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 待检病料的来源及处理 | 第24页 |
| 2.1.2 细胞株 | 第24页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.4 主要耗材 | 第25页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制 | 第25-27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-31页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第27页 |
| 2.2.2 狐脑干中DNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.3 PCR鉴定 | 第28页 |
| 2.2.4 MDCK细胞的复苏 | 第28-29页 |
| 2.2.5 细胞的冻存 | 第29页 |
| 2.2.6 病毒的分离 | 第29页 |
| 2.2.7 分离病毒的PCR鉴定 | 第29页 |
| 2.2.8 PRV的超速离心纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.9 病毒形态的电镜观察 | 第30页 |
| 2.2.10 间接免疫荧光试验(IFA)鉴定 | 第30页 |
| 2.2.11 病毒的TCID50的测定 | 第30页 |
| 2.2.12 动物回归试验 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-37页 |
| 2.3.1 病料PCR检测 | 第31页 |
| 2.3.2 病毒的分离与传代 | 第31-32页 |
| 2.3.3 分离病毒的PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.4 病毒超速离心纯化 | 第33页 |
| 2.3.5 电镜下病毒的形态 | 第33-34页 |
| 2.3.6 间接免疫荧光试验试验(IFA)鉴定 | 第34页 |
| 2.3.7 动物回归试验 | 第34-36页 |
| 2.3.8 病毒的TCID50的测定 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-38页 |
| 2.5 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 狐PRV间接ELISA检测方法的建立 | 第39-64页 |
| 3.1 材料及仪器 | 第39-42页 |
| 3.1.1 菌株、载体、试验动物以及病毒株 | 第39页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第39-40页 |
| 3.1.3 主要耗材 | 第40页 |
| 3.1.4 蛋白表达与纯化相关试剂 | 第40-41页 |
| 3.1.5 ELISA检测相关试剂 | 第41-42页 |
| 3.2 试验方法 | 第42-52页 |
| 3.2.1 引物的设计与合成 | 第42页 |
| 3.2.2 PRV HBfox-25株DNA的提取 | 第42页 |
| 3.2.3 目的基因的扩增与回收 | 第42-44页 |
| 3.2.4 重组质粒pMDTM18-T-gB的构建 | 第44-45页 |
| 3.2.4.1 目的片段与T载体的连接 | 第44页 |
| 3.2.4.2 连接产物的转化 | 第44页 |
| 3.2.4.3 重组质粒的提取与酶切鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.5 重组质粒pET-32a-gB的构建 | 第45-47页 |
| 3.2.5.1 载体pET-32a的酶切与回收 | 第45页 |
| 3.2.5.2 目的片段的酶切与回收 | 第45-46页 |
| 3.2.5.3 目的片段与表达载体的连接 | 第46页 |
| 3.2.5.4 连接产物的转化 | 第46页 |
| 3.2.5.5 重组质粒pET-32a-gB的制备提取与酶切鉴定 | 第46-47页 |
| 3.2.6 重组质粒的诱导表达与蛋白纯化 | 第47-49页 |
| 3.2.6.1 重组蛋白SDS-PAGE电泳鉴定 | 第47页 |
| 3.2.6.2 重组蛋白诱导表达以及最佳表达时间温度的摸索 | 第47-48页 |
| 3.2.6.3 重组蛋白的可溶性检测 | 第48页 |
| 3.2.6.4 重组蛋白的大量表达与纯化 | 第48-49页 |
| 3.2.6.5 重组蛋白的ELISA检测与最佳包被浓度的测定 | 第49页 |
| 3.2.7 兔抗狐多克隆抗体的制备 | 第49-52页 |
| 3.2.7.1 兔抗狐IgG的制备 | 第49-50页 |
| 3.2.7.2 HRP(辣根过氧化物酶)标记抗体 | 第50页 |
| 3.2.7.3 HRP酶标效果的检测 | 第50页 |
| 3.2.7.4 间接ELISA方法步骤 | 第50-51页 |
| 3.2.7.5 间接ELISA检测样品临界值的确定 | 第51页 |
| 3.2.7.6 酶标抗体最佳工作浓度的摸索 | 第51页 |
| 3.2.7.7 间接ELISA特异性试验 | 第51-52页 |
| 3.2.7.8 间接ELISA敏感性试验 | 第52页 |
| 3.3 结果与分析 | 第52-61页 |
| 3.3.1 目的基因的扩增 | 第52页 |
| 3.3.2 目的基因与T载体的构建与双酶切鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.3 重组载体pET-32a-gB质粒的构建 | 第53-54页 |
| 3.3.4 重组蛋白的鉴定 | 第54页 |
| 3.3.5 重组蛋白最佳表达温度和时间 | 第54-55页 |
| 3.3.6 重组蛋白的可溶性检测 | 第55-56页 |
| 3.3.7 蛋白的纯化以及浓度的测定 | 第56页 |
| 3.3.8 gB重组蛋白的ELISA检测与最佳包被浓度的测定 | 第56-57页 |
| 3.3.9 狐IgG的提取及纯化 | 第57页 |
| 3.3.10 兔抗体免疫效价的测定 | 第57-58页 |
| 3.3.11 兔抗狐IgG的制备以及纯化 | 第58-59页 |
| 3.3.12 抗体酶标结果的鉴定 | 第59页 |
| 3.3.13 间接ELISA检测样品临界值的确定 | 第59页 |
| 3.3.14 酶标抗体最佳工作浓度的摸索 | 第59-60页 |
| 3.3.15 间接ELISA特异性试验 | 第60页 |
| 3.3.16 间接ELISA敏感性试验 | 第60-61页 |
| 3.4 讨论 | 第61-63页 |
| 3.5 小结 | 第63-64页 |
| 第四章 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 参加科研情况说明 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
