| 缩略词 | 第8-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第13-23页 |
| 1 多花水仙概述 | 第13页 |
| 2 HDS基因的研究进展 | 第13-15页 |
| 3 NAC转录因子的研究进展 | 第15-21页 |
| 3.1 NAC转录因子的起源与结构 | 第15-16页 |
| 3.2 NAC转录因子的作用机制和调控模式 | 第16-17页 |
| 3.3 NAC转录因子生物学功能研究进展 | 第17-21页 |
| 4 本研究的内容及意义 | 第21-23页 |
| 4.1 研究的内容 | 第21-22页 |
| 4.2 研究的意义 | 第22-23页 |
| 第二章 多花水仙HDS基因的克隆与序列分析 | 第23-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株、载体和酶 | 第23-24页 |
| 2.1.3 试剂以及试剂盒 | 第24页 |
| 2.1.4 培养基、缓冲液及相关溶液的制备 | 第24-25页 |
| 2.1.5 主要仪器、设备与耗材 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-30页 |
| 2.2.1 三种花色类型多花水仙总RNA的提取、检测与逆转录 | 第26-28页 |
| 2.2.2 ‘黄花水仙2号’HDS基因cDNA保守区的获得 | 第28页 |
| 2.2.3 ‘黄花水仙2号’HDS基因cDNA的3'末端末端序列和5'末端扩增 | 第28页 |
| 2.2.4 目的片段回收、连接、转化、阳性筛选与测序 | 第28-29页 |
| 2.2.5 ‘黄花水仙2号’HDS基因cDNA序列的拼接 | 第29页 |
| 2.2.6 三种花色类型多花水仙HDS基因ORF的克隆 | 第29-30页 |
| 2.2.7 序列分析 | 第30页 |
| 2.2.8 ‘黄花水仙2号’和‘金盏银台’qRT-PCR分析 | 第30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-37页 |
| 2.3.1 多花水仙总RNA的提取 | 第31页 |
| 2.3.2 多花水仙HDS基因3'-RACE和5'-RACE扩增结果 | 第31-32页 |
| 2.3.3 多花水仙HDS基因cDNA全长克隆 | 第32-33页 |
| 2.3.4 多花水仙HDS蛋白的理化性质分析 | 第33-34页 |
| 2.3.5 多花水仙HDS功能结构域分析 | 第34页 |
| 2.3.6 多花水仙HDS基因编码氨基酸序列同源性分析 | 第34-35页 |
| 2.3.7 多花水仙HDS基因的系统进化树分析 | 第35-36页 |
| 2.3.8 多花水仙HDS基因在不同发育时期的表达分析 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 ‘云香水仙’NAC目的基因的筛选 | 第39-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第39页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第39页 |
| 3.1.2 主要仪器与耗材 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-42页 |
| 3.2.1 ‘云香水仙’转录组数据库中7个NAC基因的初步筛选 | 第39页 |
| 3.2.2 ‘云香水仙’鳞茎的胁迫处理与采样 | 第39-40页 |
| 3.2.3 '云香水仙’RNA的提取与检测 | 第40页 |
| 3.2.4 引物设计 | 第40-41页 |
| 3.2.5 实时荧光定量PCR反应 | 第41-42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42页 |
| 3.3.1 ‘云香水仙’NAC基因的筛选结果 | 第42页 |
| 3.3.2 ‘云香水仙’幼叶总RNA质量 | 第42页 |
| 3.4 胁迫处理条件下‘云香水仙’叶片中不同NAC基因的表达差异 | 第42-44页 |
| 3.5 讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 ‘云香水仙’和‘黄花水仙2号’NAC基因的克隆与序列分析 | 第45-57页 |
| 4.1 实验材料 | 第45-47页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第45页 |
| 4.1.2 菌株、载体和酶 | 第45-46页 |
| 4.1.3 试剂以及试剂盒 | 第46页 |
| 4.1.4 主要仪器、设备与耗材 | 第46-47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-50页 |
| 4.2.1 多花水仙总RNA的提取与检测 | 第47页 |
| 4.2.2 引物设计 | 第47-48页 |
| 4.2.3 cDNA的合成 | 第48页 |
| 4.2.4 PCR扩增目的基因 | 第48页 |
| 4.2.5 目的片段的回收 | 第48页 |
| 4.2.6 目的片段与载体的连接 | 第48-49页 |
| 4.2.7 连接产物转化、阳性筛选与测序 | 第49-50页 |
| 4.2.8 序列分析 | 第50页 |
| 4.3 结果与分析 | 第50-55页 |
| 4.3.1 两种花色类型多花水仙总RNA提取的质量 | 第50-51页 |
| 4.3.2 多花水仙NAC基因cDNA的ORF克隆 | 第51-52页 |
| 4.3.3 多花水仙NtNAC蛋白的理化性质分析 | 第52页 |
| 4.3.4 多花水仙NtNAC功能结构域分析 | 第52-53页 |
| 4.3.5 多花水仙NAC基因编码的氨基酸序列同源性分析 | 第53-54页 |
| 4.3.6 多花水仙NtNAC基因的系统进化树分析 | 第54-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 2个NAC基因在‘云香水仙’不同组织及不同胁迫处理条件下的表达情况 | 第57-66页 |
| 5.1 实验材料 | 第57-58页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第57页 |
| 5.1.2 实验中使用的试剂盒 | 第57页 |
| 5.1.3 仪器、设备与耗材 | 第57-58页 |
| 5.1.4 实验中用到的溶液 | 第58页 |
| 5.2 实验方法 | 第58-60页 |
| 5.2.1 ‘云香水仙’不同组织RNA的提取 | 第58页 |
| 5.2.2 不同胁迫处理及‘云香水仙’RNA的提取 | 第58-59页 |
| 5.2.3 cDNA的合成 | 第59页 |
| 5.2.4 引物设计 | 第59页 |
| 5.2.5 ‘云香水仙’NtNAC基因qRT-PCR分析 | 第59-60页 |
| 5.3 结果与分析 | 第60-64页 |
| 5.3.1 ‘云香水仙’各组织和不同胁迫处理总RNA的提取 | 第60页 |
| 5.3.2 ‘云香水仙’NtNAC基因在不同组织内的表达情况 | 第60-61页 |
| 5.3.3 ‘云香水仙’NtNAC基因在不同胁迫处理条件下的表达分析 | 第61-64页 |
| 5.4 讨论 | 第64-66页 |
| 第六章 ‘云香水仙’NtNACa、NtNACb基因表达载体的构建 | 第66-77页 |
| 6.1 材车 | 第66页 |
| 6.1.1 载体和菌株 | 第66页 |
| 6.1.2 试剂盒 | 第66页 |
| 6.2 实验方法 | 第66-70页 |
| 6.2.1 引物设计与合成 | 第66-67页 |
| 6.2.2 带酶切位点的目的基因的克隆与回收 | 第67-68页 |
| 6.2.3 目的基因与T载体连接、酶切与回收 | 第68页 |
| 6.2.4 质粒提取 | 第68-69页 |
| 6.2.5 质粒的酶切与回收 | 第69-70页 |
| 6.2.6 质粒的连接反应 | 第70页 |
| 6.2.7 重组质粒的转化与涂板 | 第70页 |
| 6.2.8 重组质粒鉴定 | 第70页 |
| 6.3 结果与分析 | 第70-76页 |
| 6.3.1 带有酶切位点的基因NtNACa 和 NtNACb的PCR扩增结果 | 第70-71页 |
| 6.3.2 重组质粒的构建结果 | 第71-76页 |
| 6.4 讨论 | 第76-77页 |
| 附录1 重组质粒上目的基因片段测序结果 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
