| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-37页 |
| 1.1 PPARγ的亚型和分布 | 第11-13页 |
| 1.1.1 PPARγ的亚型 | 第11-13页 |
| 1.1.2 PPARγ的分布 | 第13页 |
| 1.2 PPARγ的结构 | 第13-17页 |
| 1.2.1 DNA结合结构域(DBD) | 第14页 |
| 1.2.2 配体结合结构域(LBD) | 第14-16页 |
| 1.2.3 PPARγ/DNA /RXRα复合物结构 | 第16-17页 |
| 1.3 PPARγ的激活过程 | 第17-18页 |
| 1.4 PPARγ的生理功能 | 第18-23页 |
| 1.4.1 PPARγ与糖类代谢和胰岛素敏感性 | 第20-21页 |
| 1.4.2 PPARγ与脂类代谢和脂肪分化 | 第21-23页 |
| 1.5 PPARγ的过度激活与副作用 | 第23-25页 |
| 1.6 人体内PPARγ基因的突变 | 第25-29页 |
| 1.6.1 不造成脂肪代谢障碍的人体PPARγ基因多态性 | 第26-28页 |
| 1.6.2 造成脂肪代谢障碍的人体PPARγ基因突变体 | 第28-29页 |
| 1.7 用来研究PPARγ在代谢疾病中作用的小鼠模型 | 第29-35页 |
| 1.7.1 PPARγ全身性敲除小鼠 | 第31页 |
| 1.7.2 PPARγ全身性敲除的杂合子小鼠 | 第31-32页 |
| 1.7.3 PPARy脂肪特异性敲除小鼠 | 第32-33页 |
| 1.7.4 PPARy肌肉特异性敲除小鼠 | 第33页 |
| 1.7.5 PPARγ肝脏特异性敲除小鼠 | 第33-34页 |
| 1.7.6 PPARγ点突变小鼠 | 第34-35页 |
| 1.8 目的和意义 | 第35-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-56页 |
| 2.1 本论文所有药品试剂和仪器 | 第37-38页 |
| 2.2 分子克隆相关方法 | 第38-44页 |
| 2.2.1 质粒 | 第38页 |
| 2.2.2 质粒构建 | 第38-41页 |
| 2.2.3 PPARγ蛋白表达与纯化 | 第41-42页 |
| 2.2.4 DpnI酶介导的定点突变质粒构建 | 第42-44页 |
| 2.3 细胞培养 | 第44-46页 |
| 2.3.1 细胞株 | 第44页 |
| 2.3.2 原代胚胎成纤维细胞的提取与诱导分化 | 第44-46页 |
| 2.4 荧光素酶报告基因分析 | 第46页 |
| 2.5 小鼠实验 | 第46-53页 |
| 2.5.1 点突变(Arg134Ala/Arg135Ala/Arg138Ala)基因修饰小鼠的制备 | 第46-48页 |
| 2.5.2 小鼠高脂喂食 | 第48页 |
| 2.5.3 小鼠组织的收取与保存 | 第48页 |
| 2.5.4 葡萄糖耐受实验(OGTT) | 第48-49页 |
| 2.5.5 胰岛素敏感实验(ipITT) | 第49页 |
| 2.5.6 小鼠生理指标的测定 | 第49-51页 |
| 2.5.7 小鼠各组织切片的制作 | 第51-53页 |
| 2.6 RT-PCR的过程 | 第53-56页 |
| 2.6.1 mRNA的提取 | 第53-54页 |
| 2.6.2 Q-PCR | 第54-56页 |
| 3 实验结果 | 第56-76页 |
| 3.1 PPARγ-DBD与DNA结合模式的结构学分析 | 第56-59页 |
| 3.2 PPARγ三突变致使PPARγ在体外失去与DNA结合的能力 | 第59-60页 |
| 3.3 PPARγ三突变基因修饰小鼠 | 第60-76页 |
| 3.3.1 PPARy三突变基因修饰小鼠纯合胚胎致死 | 第61-63页 |
| 3.3.2 正常喂食情况下PPARγ~(3RA/+)与WT小鼠整体代谢差异不大 | 第63-67页 |
| 3.3.3 高脂喂食加重PPARγ~(3RA/+)小鼠的脂肪细胞肥大 | 第67-69页 |
| 3.3.4 高脂喂食加重PPARγ~(3RA/+)小鼠的肝脂肪变性 | 第69-70页 |
| 3.3.5 高脂喂食加重PPARγ~(3RA/+)小鼠的胰岛素抵抗 | 第70-72页 |
| 3.3.6 PPARγ激动剂的处理可以改善PPARγ~(3RA/+)小鼠的代谢特征 | 第72-75页 |
| 3.3.7 PPARγ~(3RA/+)小鼠代谢紊乱的关键性因素之一:Leptin | 第75-76页 |
| 4 结论与讨论 | 第76-81页 |
| 4.1 PPARγ转录功能与白色脂肪的异位积累 | 第77-78页 |
| 4.2 高脂喂食加重PPARγ~(3RA/+)鼠代谢紊乱的关键因素:Glut4和Leptin | 第78页 |
| 4.3 PPARγ3RA突变小鼠和PPARγ全敲除小鼠 | 第78-80页 |
| 4.4 本论文的不足和展望 | 第80页 |
| 4.5 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
