| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词 | 第9-14页 |
| 前言 | 第14-21页 |
| 参考文献 | 第17-21页 |
| 第一章 综述 | 第21-53页 |
| 1.1 沙眼衣原体感染的免疫应答 | 第21-26页 |
| 1.1.1 沙眼衣原体概述 | 第21-22页 |
| 1.1.2 沙眼衣原体的免疫应答机制 | 第22-25页 |
| 1.1.3 衣原体蛋白酶在免疫应答中的作用 | 第25-26页 |
| 1.2 cGAS-cGAMP-STING通路概叙 | 第26-35页 |
| 1.2.1 胞质DNA识别受体简介以及STING的发现与功能 | 第26-29页 |
| 1.2.2 cGAS和cGAMP的鉴定与功能 | 第29-33页 |
| 1.2.3 cGAS-STING介导病原微生物感染中的免疫应答 | 第33-35页 |
| 参考文献 | 第35-53页 |
| 第二章 沙眼衣原体感染激活Ⅰ型干扰素通路依赖于RIG-Ⅰ/MAVS和cGAS/STING通路 | 第53-95页 |
| 引言 | 第53-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 2.1.1 细胞系及细胞培养 | 第55页 |
| 2.1.2 细菌与质粒 | 第55页 |
| 2.1.3 抗体 | 第55页 |
| 2.1.4 PCR相关材料 | 第55页 |
| 2.1.5 核苷酸类标准品 | 第55页 |
| 2.1.6 其他主要试剂 | 第55-56页 |
| 2.1.7 实验仪器 | 第56页 |
| 2.1.8 耗材 | 第56页 |
| 2.2 实验方法 | 第56-64页 |
| 2.2.1 细菌的扩增培养以及滴度测定 | 第56-57页 |
| 2.2.2 细胞总RNA提取以及RT-PCR | 第57-58页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR | 第58-59页 |
| 2.2.4 CT012原核表达载体构建、蛋白表达纯化以及抗体制备 | 第59页 |
| 2.2.5 变性与非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第59-60页 |
| 2.2.6 免疫荧光 | 第60页 |
| 2.2.7 细菌总核酸的提取与处理 | 第60页 |
| 2.2.8 带His标签STING蛋白稳定细胞系的建立 | 第60-61页 |
| 2.2.9 酶催化反应以及HPLC检测 | 第61页 |
| 2.2.10 c-di-AMP与cGAMP的提取以及LC-MS检测 | 第61-62页 |
| 2.2.11 质粒构建和细胞转染 | 第62-63页 |
| 2.2.12 荧光素酶双报告基因实验 | 第63页 |
| 2.2.13 统计学方法 | 第63-64页 |
| 2.3 实验结果 | 第64-84页 |
| 2.3.1 衣原体感染HeLa 229细胞12小时开始产生c-di-AMP | 第64-66页 |
| 2.3.2 衣原体CT012蛋白催化产生c-di-AMP | 第66-69页 |
| 2.3.3 c-di-AMP激活Ⅰ型干扰素通路依赖于STNG | 第69-71页 |
| 2.3.4 衣原体感染HeLa 229细胞过程中Ⅰ型干扰素通路活化早于c-di-AMP的释放 | 第71-72页 |
| 2.3.5 衣原体核酸提取物能显著的激活Ⅰ型干扰素通路 | 第72-74页 |
| 2.3.6 衣原体诱导IFNP的产生依赖于RIG-I/MAVS和cGAS/STING通路 | 第74-79页 |
| 2.3.7 衣原体感染过程中释放cGAMP | 第79-84页 |
| 2.4 讨论 | 第84-86页 |
| 2.5 小结 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
| 第三章 沙眼衣原体裂解cGAS蛋白的研究 | 第95-120页 |
| 引言 | 第95-97页 |
| 3.1 实验材料 | 第97页 |
| 3.1.1 细胞培养 | 第97页 |
| 3.1.2 细菌与质粒 | 第97页 |
| 3.1.3 实验动物 | 第97页 |
| 3.1.4 抗体及试剂 | 第97页 |
| 3.2 实验方法 | 第97-101页 |
| 3.2.1 衣原体感染与纯化 | 第97页 |
| 3.2.2 质粒构建 | 第97-98页 |
| 3.2.3 CPAF抗体的制备 | 第98页 |
| 3.2.4 CPAF蛋白酶制备 | 第98页 |
| 3.2.5 沙眼衣原体蛋白酶制备 | 第98-99页 |
| 3.2.6 CPAF的免疫耗竭实验 | 第99页 |
| 3.2.7 体外切割实验 | 第99页 |
| 3.2.8 His-cGAS以及GST-cGAS制备 | 第99页 |
| 3.2.9 酶催化反应以及HPLC检测 | 第99-100页 |
| 3.2.10 免疫印迹 | 第100-101页 |
| 3.3 实验结果 | 第101-110页 |
| 3.3.1 衣原体感染过程中cGAS发生裂解 | 第101-102页 |
| 3.3.2 衣原体感染过程中对cGAS的切割具有普遍性 | 第102-103页 |
| 3.3.3 切割cGAS的活性来自衣原体,而不是宿主。 | 第103-105页 |
| 3.3.4 切割cGAS蛋白酶的初步鉴定 | 第105-106页 |
| 3.3.5 重组CPAF蛋白能够切割cGAS | 第106-108页 |
| 3.3.6 CPAF切割cGAS阻止cGAMP的合成 | 第108-110页 |
| 3.4 讨论 | 第110-112页 |
| 3.5 结论 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-120页 |
| 全文总结 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 附录 | 第122-123页 |
