| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 文献综述 | 第13-22页 |
| 1 成人T细胞白血病及HTLV-1病毒 | 第13-17页 |
| 1.1 成人T细胞白血病 | 第13-14页 |
| 1.2 HTLV-1病毒 | 第14-16页 |
| 1.3 HTLV-1病毒和NF-κB信号通路 | 第16-17页 |
| 2 Hippo/YAP信号通路 | 第17-21页 |
| 2.1 Hippo/YAP信号通路简介 | 第17-18页 |
| 2.2 Hippo/YAP信号通路功能 | 第18页 |
| 2.3 Hippo/YAP信号通路与其他信号存在互作 | 第18-20页 |
| 2.4 Hippo/YAP信号通路与癌症 | 第20-21页 |
| 3 研究内容、目的和意义 | 第21-22页 |
| 第一章 YAP在ATL细胞株中存在高表达 | 第22-40页 |
| 1.1 实验材料 | 第22-30页 |
| 1.1.1 细胞株 | 第22页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第22-24页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第24-26页 |
| 1.1.4 主要试剂的配制 | 第26-30页 |
| 1.2 实验方法 | 第30-37页 |
| 1.2.1 细胞复苏 | 第30页 |
| 1.2.2 悬浮细胞传代 | 第30-31页 |
| 1.2.3 贴壁细胞传代 | 第31页 |
| 1.2.4 细胞冻存 | 第31-32页 |
| 1.2.5 细胞总RNA提取与逆转录 | 第32-34页 |
| 1.2.6 RT-PCR | 第34-35页 |
| 1.2.7 免疫印迹检测 | 第35-37页 |
| 1.3 实验结果 | 第37-38页 |
| 1.3.1 YAP基因在ATL细胞株中高表达 | 第37-38页 |
| 1.3.2 YAP蛋白在ATL细胞株中的高表达 | 第38页 |
| 1.4 讨论 | 第38-40页 |
| 第二章 YAP促进ATL细胞恶性增殖 | 第40-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第40页 |
| 2.1.2 质粒 | 第40页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第40页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第40页 |
| 2.1.5 主要试剂的配置 | 第40-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-48页 |
| 2.2.1 pLKO.1-shYAP-puro质粒的制备 | 第41-45页 |
| 2.2.2 慢病毒包装及感染 | 第45-46页 |
| 2.2.3 YAP沉默效率检测 | 第46-47页 |
| 2.2.4 MTT法检测细胞活力 | 第47页 |
| 2.2.5 平板克隆形成实验检测细胞活力 | 第47-48页 |
| 2.2.6 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第48页 |
| 2.2.7 数据分析 | 第48页 |
| 2.3 实验结果 | 第48-52页 |
| 2.3.1 YAP沉默稳定株构建 | 第48-49页 |
| 2.3.2 沉默YAP抑制ATL细胞的增殖能力 | 第49-50页 |
| 2.3.3 沉默YAP能抑制ATL细胞的克隆形成能力 | 第50页 |
| 2.3.4 YAP抑制剂能阻遏ATL细胞的生长 | 第50-51页 |
| 2.3.5 沉默YAP促进ATL细胞的凋亡 | 第51-52页 |
| 2.4 讨论 | 第52-54页 |
| 第三章 Tax通过NF-κB信号通路从而激活YAP的功能 | 第54-63页 |
| 3.1 实验材料 | 第54-55页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第54页 |
| 3.1.2 质粒 | 第54-55页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第55页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第55页 |
| 3.1.5 主要试剂的配制 | 第55页 |
| 3.2 实验方法 | 第55-57页 |
| 3.2.1 质粒提取及质粒浓缩 | 第55页 |
| 3.2.2 Lipofectamine LTX and Plus Reagent转染方案 | 第55-56页 |
| 3.2.3 细胞共感染方案 | 第56页 |
| 3.2.4 双荧光素酶报告基因检测 | 第56-57页 |
| 3.2.5 数据分析 | 第57页 |
| 3.3 实验结果 | 第57-61页 |
| 3.3.1 ATL细胞中YAP功能呈现激活状态 | 第57-58页 |
| 3.3.2 HTLV-1能激活YAP的功能 | 第58-59页 |
| 3.3.3 病毒蛋白Tax对YAP功能的激活必须依赖NF-κB信号通路 | 第59-61页 |
| 3.4 讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 NF-κB/p65对YAP功能的激活作用及其分子机制 | 第63-73页 |
| 4.1 实验材料 | 第63-64页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第63页 |
| 4.1.2 质粒 | 第63页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第63-64页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第64页 |
| 4.1.5 主要试剂的配制 | 第64页 |
| 4.2 实验方法 | 第64-67页 |
| 4.2.1 双荧光素酶报告基因实验 | 第64页 |
| 4.2.2 免疫共沉淀实验 | 第64-65页 |
| 4.2.3 荧光观察实验 | 第65-66页 |
| 4.2.4 细胞核蛋白与细胞浆蛋白提取 | 第66-67页 |
| 4.2.5 数据分析 | 第67页 |
| 4.3 实验结果 | 第67-71页 |
| 4.3.1 p65能激活YAP的功能 | 第67-68页 |
| 4.3.2 p65与YAP结合 | 第68-69页 |
| 4.3.3 p65抑制YAP-S127磷酸化 | 第69页 |
| 4.3.4 p65通过抑制YAP与14-3-3结合从而促进YAP入核 | 第69-71页 |
| 4.4 讨论 | 第71-73页 |
| 第五章 小结与展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 附录 | 第84-86页 |
| 缩略语 | 第84-85页 |
| 引物序列表 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第87-89页 |
