| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第12-18页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第12页 |
| 1.2 水牛结核病的流行现状 | 第12-13页 |
| 1.3 水牛结核病的危害 | 第13页 |
| 1.4 水牛结核病的诊断 | 第13-18页 |
| 1.4.1 细菌学诊断 | 第14页 |
| 1.4.2 免疫学诊断 | 第14-18页 |
| 1.4.3 分子生物学诊断 | 第18页 |
| Part 1 水牛结核病比较皮试法的建立与分析 | 第18-37页 |
| 2 研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-26页 |
| 3.1 研究材料 | 第19-20页 |
| 3.1.1 主要试剂与耗材 | 第19页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 3.1.3 试验动物 | 第20页 |
| 3.2 研究方法 | 第20-26页 |
| 3.2.1 BCG的培养与鉴定 | 第20-22页 |
| 3.2.2 牛结核病阴性牛的筛选 | 第22-24页 |
| 3.2.3 BCG接种奶水牛 | 第24页 |
| 3.2.4 接种牛转阳状态观察 | 第24-25页 |
| 3.2.5 水牛皮试法的标准化 | 第25-26页 |
| 4 结果与分析 | 第26-35页 |
| 4.1 BCG的培养与鉴定 | 第26页 |
| 4.2 牛结核病阴性牛的筛选 | 第26-27页 |
| 4.3 BCG接种奶水牛 | 第27页 |
| 4.4 接种牛转阳状态观察 | 第27-29页 |
| 4.5 水牛皮试法的标准化 | 第29-35页 |
| 4.5.1 奶牛与水牛皮厚值比较 | 第29-30页 |
| 4.5.2 不同品种水牛之间差异性分析 | 第30页 |
| 4.5.3 不同年龄水牛之间差异性分析 | 第30-31页 |
| 4.5.4 BCG接种水牛后的皮试检测 | 第31-33页 |
| 4.5.5 水牛皮试法诊断标准的初步确定 | 第33-35页 |
| 5 讨论 | 第35-37页 |
| Prat 2 抗水牛IFN-γ单克隆抗体与多克隆抗体的制备 | 第37-57页 |
| 1 目的与意义 | 第37页 |
| 2 研究材料 | 第37-39页 |
| 2.1 菌种、细胞与实验动物 | 第37页 |
| 2.2 研究所需主要试剂 | 第37-38页 |
| 2.3 研究所需配制的试剂 | 第38-39页 |
| 3 研究方法 | 第39-47页 |
| 3.1 水牛IFN-γ的原核表达与鉴定 | 第39-41页 |
| 3.1.1 重组BbIFN-γ的诱导表达 | 第39-40页 |
| 3.1.2 SDS-PAGE蛋白凝胶电泳 | 第40页 |
| 3.1.3 重组蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| 3.1.4 重组蛋白的鉴定 | 第41页 |
| 3.2 重组原核表达水牛IFN-γ生物学活性分析 | 第41-42页 |
| 3.2.1 抗VSV活性的测定 | 第41页 |
| 3.2.2 抗IBRV活性的测定 | 第41-42页 |
| 3.3 抗水牛IFN-γ单克隆抗体的制备与鉴定 | 第42-46页 |
| 3.3.1 小鼠免疫 | 第42页 |
| 3.3.2 建立间接ELISA检测方法 | 第42页 |
| 3.3.3 细胞融合 | 第42-45页 |
| 3.3.4 单克隆抗体Ig亚型检测 | 第45页 |
| 3.3.5 单克隆抗体的生产 | 第45页 |
| 3.3.6 单克隆抗体的纯化 | 第45-46页 |
| 3.3.7 抗水牛IFN-γ单克隆抗体的鉴定 | 第46页 |
| 3.4 抗水牛IFN-γ多克隆抗体的制备与鉴定 | 第46-47页 |
| 3.4.1 多克隆抗体的制备 | 第46-47页 |
| 3.4.2 多克隆抗体的鉴定 | 第47页 |
| 4 结果与分析 | 第47-54页 |
| 4.1 水牛IFN-γ的原核表达与鉴定 | 第47-48页 |
| 4.2 重组原核表达水牛IFN-γ生物学活性分析 | 第48-49页 |
| 4.3 抗水牛IFN-γ单克隆抗体的制备与鉴定 | 第49-54页 |
| 4.3.1 小鼠免疫 | 第49页 |
| 4.3.2 细胞融合 | 第49-50页 |
| 4.3.3 抗水牛IFN-γ单克隆抗体的制备与鉴定 | 第50-52页 |
| 4.3.4 抗水牛IFN-γ多克隆抗体的制备与鉴定 | 第52-54页 |
| 5 讨论 | 第54-57页 |
| 5.1 动物免疫 | 第54页 |
| 5.2 细胞融合 | 第54-55页 |
| 5.3 IgM亚型抗体的纯化 | 第55页 |
| 5.4 单克隆抗体的改造 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65-76页 |
| 附录 1 ：2017年湖北荆门某水牛场免疫前水牛皮试检测结果(单位：mm) | 第65-68页 |
| 附录 2 ：免疫60天后水牛皮试检测结果(单位：mm) | 第68-70页 |
| 附录 3 ：免疫120天后水牛皮试检测结果(单位：mm) | 第70-72页 |
| 附录 4 ：奶牛皮试结果(单位mm) | 第72-76页 |
