| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-13页 |
| 1.1 乳腺癌的现状 | 第10页 |
| 1.2 乳腺癌的发病机理 | 第10-12页 |
| 1.3 乳腺癌的临床分型 | 第12-13页 |
| 第二章 自分泌的人类生长激素促进雌激素受体阴性的乳腺癌细胞的肿瘤起始和转移 | 第13-27页 |
| 2.1 引言 | 第13-16页 |
| 2.1.1 人类生长激素 | 第13-14页 |
| 2.1.2 肿瘤干细胞 | 第14-16页 |
| 2.2 实验结果 | 第16-25页 |
| 2.2.1 过表达hGH增强ER-MC细胞的增殖 | 第16-18页 |
| 2.2.2 hGH增强MDA-MB-453细胞的肿瘤起始能力 | 第18-20页 |
| 2.2.3 hGH增强ER-MC细胞的迁移和侵袭 | 第20-21页 |
| 2.2.4 hGH促进MDA-MB-453细胞的转移 | 第21-22页 |
| 2.2.5 hGH调节ER-MC细胞的肿瘤干细胞样群体 | 第22-25页 |
| 2.3 结论 | 第25-27页 |
| 第三章 MIR191/425基因簇的扩增导致乳腺癌的恶性表型 | 第27-61页 |
| 3.1 引言 | 第27-32页 |
| 3.1.1 microRNA概述 | 第27-30页 |
| 3.1.1.1 microRNA简介 | 第27页 |
| 3.1.1.2 microRNA的转录和加工成熟 | 第27-28页 |
| 3.1.1.3 microRNA在肿瘤中的作用 | 第28-30页 |
| 3.1.2 Dicer与肿瘤 | 第30页 |
| 3.1.3 基因组不稳定性 | 第30-32页 |
| 3.2 实验结果 | 第32-58页 |
| 3.2.1 MIR191/425基因簇在乳腺癌组织中呈现基因扩增 | 第32-34页 |
| 3.2.2 miR-191/425在乳腺癌中高表达及临床预后分析 | 第34-36页 |
| 3.2.3 miR-191/425靶标Dicer | 第36-40页 |
| 3.2.4 miR-191/425通过下调Dicer促进乳腺癌细胞的增殖 | 第40-44页 |
| 3.2.5 miR-191/425通过下调Dicer促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭 | 第44-48页 |
| 3.2.6 miR-191/425促进乳腺癌细胞在体内的增殖和转移 | 第48-53页 |
| 3.2.7 miR-191/425促进乳腺癌细胞的上皮间质转化 | 第53-55页 |
| 3.2.8 miR-191/425通过调控let-7家族促进肿瘤发生 | 第55-58页 |
| 3.3 结论 | 第58-61页 |
| 第四章 材料与方法 | 第61-74页 |
| 4.1 乳腺癌病人临床组织样本 | 第61页 |
| 4.2 细胞培养和培养用试剂 | 第61页 |
| 4.3 病理样本的DNA抽提 | 第61-62页 |
| 4.4 病理样本的microRNA和total RMA抽提 | 第62页 |
| 4.5 所用质粒的构建 | 第62-64页 |
| 4.5.1 miR-191,miR-425过表达载体的构建 | 第62-63页 |
| 4.5.2 miR-191,miR-425的Sponge载体的构建 | 第63-64页 |
| 4.5.3 目的基因3'UTR的psi-CHECK2荧光素酶报告载体的构建 | 第64页 |
| 4.5.4 shRNA敲低DICER1的质粒构建 | 第64页 |
| 4.5.5 hGH表达载体的构建 | 第64页 |
| 4.6 质粒和RNA的细胞转染 | 第64-65页 |
| 4.7 细胞RNA和蛋白质的抽提 | 第65页 |
| 4.8 细胞增殖的MTT和克隆形成及细胞计数检测 | 第65-66页 |
| 4.9 软琼脂Soft Agar克隆形成实验 | 第66页 |
| 4.10 2D和3D基质胶克隆形成实验 | 第66-67页 |
| 4.11 Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭 | 第67-68页 |
| 4.12 划痕愈合(Would Healing)实验 | 第68页 |
| 4.13 分散实验 | 第68-69页 |
| 4.14 细胞骨架的免疫荧光染色 | 第69-70页 |
| 4.15 双荧光素酶报告载体实验 | 第70-71页 |
| 4.16 小鼠原位乳腺癌荷瘤实验 | 第71-72页 |
| 4.17 尾静脉注射小鼠的转移实验 | 第72页 |
| 4.18 乳腺癌细胞的球囊悬浮培养 | 第72-73页 |
| 4.19 ALDH阳性细胞比例的流式检测 | 第73页 |
| 4.20 Side Population法检测干细胞比例 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 附录A 实验试剂 | 第84-86页 |
| 附录B 实验主要仪器设备 | 第86-88页 |
| 附录C 实验室常规溶液配制 | 第88-92页 |
| 附录D 实验室常规溶液配制 | 第92-104页 |
| 附录E 引物序列,siRNA/shRNA序列及抗体信息 | 第104-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第120-121页 |
