| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-18页 |
| 1.1 赛葵黄脉病毒致病机理研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2 病毒侵染对寄主植物及寄主叶绿体的影响 | 第14-16页 |
| 1.3 RNA-Seq在研究植物病毒与寄主互作方面的应用 | 第16-17页 |
| 1.4 本研究目的及其意义 | 第17-18页 |
| 第二章 MaYVV/MaYVB侵染本氏烟的比较转录组学分析 | 第18-32页 |
| 2.1 材料 | 第18页 |
| 2.1.1 寄主植物与毒源 | 第18页 |
| 2.1.2 试剂 | 第18页 |
| 2.2 方法 | 第18-21页 |
| 2.2.1 病毒侵染性克隆的活化与接毒 | 第18-19页 |
| 2.2.2 TRizol法提取本氏烟总RNA | 第19页 |
| 2.2.3 cDNA第一条链的反转录合成 | 第19-20页 |
| 2.2.4 CTAB法提取本氏烟总DNA | 第20页 |
| 2.2.5 MaYVV/MaYVB侵染本氏烟PCR检测 | 第20-21页 |
| 2.2.6 样品准备及转录组测序 | 第21页 |
| 2.2.7 RT-qPCR | 第21页 |
| 2.3 结果与分析 | 第21-29页 |
| 2.3.1 MaYVVMaYVB侵染寄主症状观察 | 第21-22页 |
| 2.3.2 MaYVV/MaYVB的PCR检测 | 第22页 |
| 2.3.3 RNA-Seq数据质量分析 | 第22-25页 |
| 2.3.4 RNA-Seq基因表达水平分析及差异表达基因筛选 | 第25-26页 |
| 2.3.5 差异表达基因GO与KEGG富集分析 | 第26-27页 |
| 2.3.6 叶绿体相关差异表达基因的筛选与RT-qPCR验证 | 第27-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-32页 |
| 第三章 叶绿体相关差异表达基因的VIGS分析 | 第32-46页 |
| 3.1 材料 | 第32页 |
| 3.1.1 试剂 | 第32页 |
| 3.1.2 仪器 | 第32页 |
| 3.2 方法 | 第32-38页 |
| 3.2.1 构建VIGS载体的目的片段PCR扩增 | 第32-33页 |
| 3.2.2 目的片段的回收 | 第33页 |
| 3.2.3 目的片段与T载体的连接 | 第33-34页 |
| 3.2.4 大肠杆菌感受态(DH5α)热激转化 | 第34页 |
| 3.2.5 阳性克隆的PCR鉴定 | 第34页 |
| 3.2.6 质粒的提取 | 第34-35页 |
| 3.2.7 序列的测定与分析 | 第35页 |
| 3.2.8 酶切、产物回收及纯化 | 第35-36页 |
| 3.2.9 质粒提取 | 第36页 |
| 3.2.10 农杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第36-37页 |
| 3.2.11 菌体收集和农杆菌浸润本氏烟 | 第37-38页 |
| 3.2.12 TRV的PCR检测 | 第38页 |
| 3.2.13 RT-qPCR | 第38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-43页 |
| 3.3.1 TRV重组质粒构建 | 第38-41页 |
| 3.3.2 TRV系统侵染的PCR检测 | 第41-42页 |
| 3.3.3 候选基因沉默效率分析 | 第42页 |
| 3.3.4 本氏烟表型观察 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-46页 |
| 第四章 沉默候选基因对叶绿体以及MaYVV/MaYVB侵染的影响 | 第46-56页 |
| 4.1 材料 | 第46页 |
| 4.1.1 供试植株 | 第46页 |
| 4.1.2 毒源 | 第46页 |
| 4.1.3 试剂 | 第46页 |
| 4.1.4 仪器 | 第46页 |
| 4.2 方法 | 第46-48页 |
| 4.2.1 本氏烟叶绿素的提取 | 第46-47页 |
| 4.2.2 本氏烟叶绿体超微结构观察 | 第47页 |
| 4.2.3 侵染性克隆菌株活化及接毒 | 第47页 |
| 4.2.4 DNA提取 | 第47页 |
| 4.2.5 MaYVV/MaYVB的PCR检测 | 第47-48页 |
| 4.2.6 MaYVV/MaYVB的qPCR分析 | 第48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-53页 |
| 4.3.1 沉默候选基因对本氏烟叶绿素含量影响 | 第48-50页 |
| 4.3.2 沉默候选基因对叶绿体超微结构的影响 | 第50-51页 |
| 4.3.3 MaYVV/MaYVB的PCR检测 | 第51页 |
| 4.3.4 沉默候选基因后接种MaYVV/MaYVB侵染性克隆的本氏烟表型观察 | 第51-53页 |
| 4.3.5 MaYVV以及MaYVB的qPCR分析 | 第53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-56页 |
| 第五章 结论与展望 | 第56-58页 |
| 5.1 结论 | 第56页 |
| 5.2 展望 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 附录A VIGS目的片段扩增引物序列 | 第66-68页 |
| 附录B 本论文中所用缩写词及中英文对照 | 第68-70页 |
| 附录C 常用生化及分子生物学试剂与仪器 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
