摘要 | 第12-15页 |
Abstract | 第15-18页 |
第一章 绪论 | 第19-40页 |
1.1 中药毒性 | 第19-23页 |
1.2 附子 | 第23-28页 |
1.2.1 附子的配伍与毒性研究 | 第24页 |
1.2.2 乌头类生物碱的毒性 | 第24-27页 |
1.2.2.1 毒性与电压依赖性钠通道的作用 | 第25页 |
1.2.2.2 影响神经递质的释放 | 第25-26页 |
1.2.2.3 促进脂质过氧化 | 第26页 |
1.2.2.4 诱导细胞凋亡 | 第26-27页 |
1.2.3 甘草次酸及6-姜酚的作用 | 第27页 |
1.2.4 中药毒理学常用研究手段 | 第27-28页 |
1.3 代谢组学 | 第28-38页 |
1.3.1 细胞代谢组学 | 第29-31页 |
1.3.2 细胞代谢组学的实验设计 | 第31页 |
1.3.3 细胞培养和刺激 | 第31-32页 |
1.3.4 淬灭和代谢物提取 | 第32-33页 |
1.3.5 代谢物检测 | 第33-35页 |
1.3.6 定性和定量细胞代谢物数据分析 | 第35-37页 |
1.3.7 细胞代谢组学的无监督和有监督数据分析 | 第37-38页 |
1.4 立题依据与研究思路 | 第38-40页 |
1.4.1 立题依据 | 第38-39页 |
1.4.2 研究思路 | 第39-40页 |
第二章 细胞代谢组学样品制备方法优化 | 第40-68页 |
2.1 仪器与试剂 | 第41-43页 |
2.1.1 试剂 | 第41页 |
2.1.2 仪器 | 第41-42页 |
2.1.3 主要实验溶液的配制 | 第42-43页 |
2.1.3.1 组织消化储备液的配制 | 第42页 |
2.1.3.2 5-溴脱氧尿嘧啶(5-BrdU)溶液的配制 | 第42-43页 |
2.1.3.3 青霉素-链霉素抑菌液的配制 | 第43页 |
2.1.3.4 PBS/D_2O的配制 | 第43页 |
2.2 方法 | 第43-47页 |
2.2.1 原代乳鼠心肌细胞分离方法 | 第43-44页 |
2.2.2 原代乳鼠心肌细胞收获和提取过程优化 | 第44-46页 |
2.2.3 细胞培养基样品核磁共振样品制备过程的优化 | 第46页 |
2.2.4 心肌细胞形态观察 | 第46页 |
2.2.5 核磁共振测试样品的配制 | 第46页 |
2.2.6 核磁共振数据的采集 | 第46页 |
2.2.7 提取试剂对细胞培养皿的溶解作用 | 第46-47页 |
2.2.8 核磁共振数据的处理 | 第47页 |
2.2.9 代谢物谱峰峰面积数据的获取 | 第47页 |
2.3 结果 | 第47-65页 |
2.3.1 心肌细胞培养不同时间的显微观察 | 第47-49页 |
2.3.2 提取溶剂对空白培养皿的溶解作用 | 第49-50页 |
2.3.3 两种不同提取方法获得的~1H NMR谱的强度比较 | 第50页 |
2.3.4 心肌细胞中代谢物化学位移的指认 | 第50-53页 |
2.3.5 心肌细胞不同收获方式获得的细胞提取物比较 | 第53-56页 |
2.3.6 心肌细胞经甲醇、乙腈提取获得细胞提取物的比较 | 第56-59页 |
2.3.7 不同提取方法获得的代谢物浓度的数据分析 | 第59-64页 |
2.3.8 细胞培养基的样品制备方法比较 | 第64-65页 |
2.4 讨论 | 第65-68页 |
第三章 乌头类生物碱及其配伍的毒理学研究 | 第68-79页 |
3.1 仪器与试剂 | 第68-70页 |
3.1.1 仪器 | 第68-69页 |
3.1.2 实验药品 | 第69页 |
3.1.3 主要实验试剂 | 第69页 |
3.1.4 主要实验溶液的配制 | 第69-70页 |
3.1.4.1 实验用药物储存液的配制 | 第69-70页 |
3.2 实验方法 | 第70-71页 |
3.2.1 新生大鼠心肌细胞培养 | 第70页 |
3.2.2 乌头碱染毒心肌细胞的模型建立 | 第70页 |
3.2.3 乌头碱染毒心肌细胞的LDH检测 | 第70页 |
3.2.4 乌头碱染毒心肌细胞的MTS检测 | 第70页 |
3.2.5 统计学分析及画图 | 第70-71页 |
3.3 结果 | 第71-77页 |
3.3.1 乌头碱及配伍甘草次酸后对心肌细胞的毒性 | 第71-72页 |
3.3.2 不同培养基时乌头碱对心肌细胞的毒性 | 第72-73页 |
3.3.3 乌头类生物碱配伍甘草次酸的毒理学研究 | 第73-75页 |
3.3.4 甘草次酸与6-姜酚单用及配伍的毒理学研究 | 第75页 |
3.3.5 乌头类生物碱与6-姜酚配伍的毒理学研究 | 第75-77页 |
3.4 讨论 | 第77-79页 |
3.4.1 乌头碱染毒体外细胞毒性效应特点 | 第77页 |
3.4.2 乌头碱对心肌细胞毒性效应与中毒机制的关系 | 第77-79页 |
第四章 乌头类生物碱的毒性及6-姜酚配伍减毒的代谢组学研究(低剂量组) | 第79-98页 |
4.1 仪器与试剂 | 第79-80页 |
4.1.1 仪器 | 第79页 |
4.1.2 试剂 | 第79页 |
4.1.3 主要实验溶液的配制 | 第79-80页 |
4.2 方法 | 第80页 |
4.2.1 原代乳鼠心肌细胞分离方法 | 第80页 |
4.2.2 乌头类生物碱给药心肌细胞过程 | 第80页 |
4.2.3 原代乳鼠心肌细胞的收获和提取过程 | 第80页 |
4.2.4 心肌细胞培养基的核磁共振样品制备过程 | 第80页 |
4.3 结果 | 第80-96页 |
4.3.1 心肌细胞~1H NMR结果 | 第80-83页 |
4.3.2 代谢组学数据分析 | 第83-90页 |
4.3.3 心肌细胞培养基~1H NMR结果 | 第90-94页 |
4.3.4 6-姜酚与乌头碱联合给药对乌头碱大鼠心肌细胞毒性影响的代谢组学研究 | 第94-96页 |
4.4 讨论 | 第96-98页 |
第五章 乌头类生物碱的毒性及6-姜酚配伍减毒的代谢组学研究(高剂量组) | 第98-128页 |
5.1 仪器与试剂 | 第98页 |
5.1.1 仪器 | 第98页 |
5.1.2 试剂 | 第98页 |
5.1.3 主要实验溶液的配制 | 第98页 |
5.2 方法 | 第98-100页 |
5.2.0 原代乳鼠心肌细胞分离方法 | 第98页 |
5.2.1 乌头类生物碱给药心肌细胞过程 | 第98-99页 |
5.2.2 原代乳鼠心肌细胞的收获和提取过程 | 第99页 |
5.2.3 心肌细胞培养基的核磁共振样品制备过程 | 第99页 |
5.2.4 气质联用测试样本的制备 | 第99页 |
5.2.5 气质联用数据的采集 | 第99-100页 |
5.2.6 气质联用数据的处理 | 第100页 |
5.3 结果 | 第100-127页 |
5.3.1 心肌细胞~1H NMR结果 | 第100-103页 |
5.3.2 乌头类生物碱对心肌细胞的毒性数据分析(高剂量组) | 第103-112页 |
5.3.3 新乌头碱给药组代谢通路及富集分析 | 第112-114页 |
5.3.4 乌头碱(12μM)与6-姜酚配伍减毒作用研究结果 | 第114-116页 |
5.3.5 心肌细胞GC/TOF-MS结果 | 第116-127页 |
5.4 讨论 | 第127-128页 |
第六章 结论 | 第128-132页 |
参考文献 | 第132-139页 |
致谢 | 第139-140页 |
个人简历 | 第140页 |