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三种乌头类生物碱对乳鼠心肌细胞毒性的代谢组学研究

摘要第12-15页
Abstract第15-18页
第一章 绪论第19-40页
    1.1 中药毒性第19-23页
    1.2 附子第23-28页
        1.2.1 附子的配伍与毒性研究第24页
        1.2.2 乌头类生物碱的毒性第24-27页
            1.2.2.1 毒性与电压依赖性钠通道的作用第25页
            1.2.2.2 影响神经递质的释放第25-26页
            1.2.2.3 促进脂质过氧化第26页
            1.2.2.4 诱导细胞凋亡第26-27页
        1.2.3 甘草次酸及6-姜酚的作用第27页
        1.2.4 中药毒理学常用研究手段第27-28页
    1.3 代谢组学第28-38页
        1.3.1 细胞代谢组学第29-31页
        1.3.2 细胞代谢组学的实验设计第31页
        1.3.3 细胞培养和刺激第31-32页
        1.3.4 淬灭和代谢物提取第32-33页
        1.3.5 代谢物检测第33-35页
        1.3.6 定性和定量细胞代谢物数据分析第35-37页
        1.3.7 细胞代谢组学的无监督和有监督数据分析第37-38页
    1.4 立题依据与研究思路第38-40页
        1.4.1 立题依据第38-39页
        1.4.2 研究思路第39-40页
第二章 细胞代谢组学样品制备方法优化第40-68页
    2.1 仪器与试剂第41-43页
        2.1.1 试剂第41页
        2.1.2 仪器第41-42页
        2.1.3 主要实验溶液的配制第42-43页
            2.1.3.1 组织消化储备液的配制第42页
            2.1.3.2 5-溴脱氧尿嘧啶(5-BrdU)溶液的配制第42-43页
            2.1.3.3 青霉素-链霉素抑菌液的配制第43页
            2.1.3.4 PBS/D_2O的配制第43页
    2.2 方法第43-47页
        2.2.1 原代乳鼠心肌细胞分离方法第43-44页
        2.2.2 原代乳鼠心肌细胞收获和提取过程优化第44-46页
        2.2.3 细胞培养基样品核磁共振样品制备过程的优化第46页
        2.2.4 心肌细胞形态观察第46页
        2.2.5 核磁共振测试样品的配制第46页
        2.2.6 核磁共振数据的采集第46页
        2.2.7 提取试剂对细胞培养皿的溶解作用第46-47页
        2.2.8 核磁共振数据的处理第47页
        2.2.9 代谢物谱峰峰面积数据的获取第47页
    2.3 结果第47-65页
        2.3.1 心肌细胞培养不同时间的显微观察第47-49页
        2.3.2 提取溶剂对空白培养皿的溶解作用第49-50页
        2.3.3 两种不同提取方法获得的~1H NMR谱的强度比较第50页
        2.3.4 心肌细胞中代谢物化学位移的指认第50-53页
        2.3.5 心肌细胞不同收获方式获得的细胞提取物比较第53-56页
        2.3.6 心肌细胞经甲醇、乙腈提取获得细胞提取物的比较第56-59页
        2.3.7 不同提取方法获得的代谢物浓度的数据分析第59-64页
        2.3.8 细胞培养基的样品制备方法比较第64-65页
    2.4 讨论第65-68页
第三章 乌头类生物碱及其配伍的毒理学研究第68-79页
    3.1 仪器与试剂第68-70页
        3.1.1 仪器第68-69页
        3.1.2 实验药品第69页
        3.1.3 主要实验试剂第69页
        3.1.4 主要实验溶液的配制第69-70页
            3.1.4.1 实验用药物储存液的配制第69-70页
    3.2 实验方法第70-71页
        3.2.1 新生大鼠心肌细胞培养第70页
        3.2.2 乌头碱染毒心肌细胞的模型建立第70页
        3.2.3 乌头碱染毒心肌细胞的LDH检测第70页
        3.2.4 乌头碱染毒心肌细胞的MTS检测第70页
        3.2.5 统计学分析及画图第70-71页
    3.3 结果第71-77页
        3.3.1 乌头碱及配伍甘草次酸后对心肌细胞的毒性第71-72页
        3.3.2 不同培养基时乌头碱对心肌细胞的毒性第72-73页
        3.3.3 乌头类生物碱配伍甘草次酸的毒理学研究第73-75页
        3.3.4 甘草次酸与6-姜酚单用及配伍的毒理学研究第75页
        3.3.5 乌头类生物碱与6-姜酚配伍的毒理学研究第75-77页
    3.4 讨论第77-79页
        3.4.1 乌头碱染毒体外细胞毒性效应特点第77页
        3.4.2 乌头碱对心肌细胞毒性效应与中毒机制的关系第77-79页
第四章 乌头类生物碱的毒性及6-姜酚配伍减毒的代谢组学研究(低剂量组)第79-98页
    4.1 仪器与试剂第79-80页
        4.1.1 仪器第79页
        4.1.2 试剂第79页
        4.1.3 主要实验溶液的配制第79-80页
    4.2 方法第80页
        4.2.1 原代乳鼠心肌细胞分离方法第80页
        4.2.2 乌头类生物碱给药心肌细胞过程第80页
        4.2.3 原代乳鼠心肌细胞的收获和提取过程第80页
        4.2.4 心肌细胞培养基的核磁共振样品制备过程第80页
    4.3 结果第80-96页
        4.3.1 心肌细胞~1H NMR结果第80-83页
        4.3.2 代谢组学数据分析第83-90页
        4.3.3 心肌细胞培养基~1H NMR结果第90-94页
        4.3.4 6-姜酚与乌头碱联合给药对乌头碱大鼠心肌细胞毒性影响的代谢组学研究第94-96页
    4.4 讨论第96-98页
第五章 乌头类生物碱的毒性及6-姜酚配伍减毒的代谢组学研究(高剂量组)第98-128页
    5.1 仪器与试剂第98页
        5.1.1 仪器第98页
        5.1.2 试剂第98页
        5.1.3 主要实验溶液的配制第98页
    5.2 方法第98-100页
        5.2.0 原代乳鼠心肌细胞分离方法第98页
        5.2.1 乌头类生物碱给药心肌细胞过程第98-99页
        5.2.2 原代乳鼠心肌细胞的收获和提取过程第99页
        5.2.3 心肌细胞培养基的核磁共振样品制备过程第99页
        5.2.4 气质联用测试样本的制备第99页
        5.2.5 气质联用数据的采集第99-100页
        5.2.6 气质联用数据的处理第100页
    5.3 结果第100-127页
        5.3.1 心肌细胞~1H NMR结果第100-103页
        5.3.2 乌头类生物碱对心肌细胞的毒性数据分析(高剂量组)第103-112页
        5.3.3 新乌头碱给药组代谢通路及富集分析第112-114页
        5.3.4 乌头碱(12μM)与6-姜酚配伍减毒作用研究结果第114-116页
        5.3.5 心肌细胞GC/TOF-MS结果第116-127页
    5.4 讨论第127-128页
第六章 结论第128-132页
参考文献第132-139页
致谢第139-140页
个人简历第140页

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