| 缩略词表 | 第7-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-40页 |
| 第一章 抗B7-H4单链抗体的研究 | 第15-24页 |
| 1.1 B7-H4分子的简介 | 第15页 |
| 1.2 B7-H4分子的结构及其分布 | 第15-16页 |
| 1.3 B7-H4分子在相关疾病方面的研究 | 第16-17页 |
| 1.3.1 B7-H4与肿瘤 | 第16-17页 |
| 1.3.2 B7-H4与自身免疫疾病 | 第17页 |
| 1.3.3 B7-H4与器官移植 | 第17页 |
| 1.4 单链抗体的简介 | 第17-18页 |
| 1.5 单链抗体在肿瘤导向治疗中的作用 | 第18页 |
| 1.6 单链抗体与免疫毒素的联系 | 第18-19页 |
| 1.7 小结 | 第19-20页 |
| 参考文献 | 第20-24页 |
| 第二章 重组免疫毒素的研究 | 第24-34页 |
| 2.1 免疫毒素的概念 | 第24页 |
| 2.2 免疫毒素组成部分的选择和类型 | 第24-28页 |
| 2.2.1 根据“弹头”的种类划分 | 第25页 |
| 2.2.2 根据“载体”的种类划分 | 第25-27页 |
| 2.2.3 临床试验的几种免疫毒素 | 第27-28页 |
| 2.3 免疫毒素的作用机制 | 第28-29页 |
| 2.4 免疫毒素面临的问题 | 第29页 |
| 2.5 免疫毒素的前景与展望 | 第29-30页 |
| 2.6 小结 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-34页 |
| 第三章 PE类重组毒素的研究 | 第34-40页 |
| 3.1 PE类毒素的概念及分子组成 | 第34页 |
| 3.2 PE类毒素的衍生物 | 第34-35页 |
| 3.3 PE类毒素的作用机制 | 第35-36页 |
| 3.4 PE类毒素的应用 | 第36-37页 |
| 3.5 小结 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-40页 |
| 第二部分 实验研究 | 第40-75页 |
| 第四章 重组毒素表达载体pET28a-anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL的构建和克隆 | 第41-52页 |
| 4.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第42页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第42页 |
| 4.1.3 质粒和菌株 | 第42-43页 |
| 4.2 实验方法与材料 | 第43-47页 |
| 4.2.1 PE38KDEL基因的合成 | 第43页 |
| 4.2.2 引物的合成 | 第43页 |
| 4.2.3 单抗anti-B7-H4-scFv基因与毒素PE38KDEL基因的扩增、克隆 | 第43-44页 |
| 4.2.4 单抗anti-B7-H4-scFv基因与毒素PE38KDEL基因的连接 | 第44-45页 |
| 4.2.5 感受态细胞的制备 | 第45页 |
| 4.2.6 重组表达载体的构建 | 第45-47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-50页 |
| 4.3.1 扩增和克隆anti-B7-H4-scFv基因、PE38KDEL基因和anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL基因的结果 | 第47-48页 |
| 4.3.2 重组基因的测序结果 | 第48-49页 |
| 4.3.3 重组表达载体的构建鉴定 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-52页 |
| 第五章 重组免疫毒素Anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL的表达、纯化及活性检测 | 第52-62页 |
| 5.1 实验材料及试剂 | 第53页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第53页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第53页 |
| 5.1.3 细胞系和模式动物 | 第53页 |
| 5.2 实验方法 | 第53-56页 |
| 5.2.1 重组蛋白Anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL的诱导表达 | 第53-54页 |
| 5.2.2 目的蛋白的变、复性 | 第54页 |
| 5.2.3 目的蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| 5.2.4 间接ELISA检测目的蛋白与B7-H4抗原的亲和性 | 第55页 |
| 5.2.5 流式细胞术检测重组毒素与不同细胞的结合活性 | 第55-56页 |
| 5.2.6 数据处理与统计 | 第56页 |
| 5.3 实验结果 | 第56-60页 |
| 5.3.1 重组毒素蛋白的表达优化 | 第56-57页 |
| 5.3.2 重组毒素蛋白的表达分析 | 第57-58页 |
| 5.3.3 重组毒素蛋白的纯化与鉴定 | 第58页 |
| 5.3.4 间接ELISA鉴定重组毒素蛋白和B7-H4抗原蛋白的亲和活性 | 第58-59页 |
| 5.3.5 流式细胞术检测重组毒素与不同细胞的结合活性 | 第59-60页 |
| 5.4 讨论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-62页 |
| 第六章 重组毒素蛋白Anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL体外和体内的生物学功能鉴定 | 第62-75页 |
| 6.1 实验材料及试剂 | 第63页 |
| 6.1.1 主要试剂 | 第63页 |
| 6.1.2 实验仪器 | 第63页 |
| 6.1.3 细胞系和模式动物 | 第63页 |
| 6.2 实验方法 | 第63-66页 |
| 6.2.1 细胞培养及形态学观察 | 第63-64页 |
| 6.2.2 MTT法检测免疫毒素对细胞增殖的影响 | 第64页 |
| 6.2.3 台盼蓝染色检测细胞活力 | 第64页 |
| 6.2.4 细胞培养 | 第64-65页 |
| 6.2.5 建立皮下移植瘤模型 | 第65页 |
| 6.2.6 肿瘤组织HE染色 | 第65-66页 |
| 6.2.7 免疫组化分析 | 第66页 |
| 6.2.8 数据处理与统计 | 第66页 |
| 6.3 结果 | 第66-72页 |
| 6.3.1 细胞形态学观察及MTT法检测细胞增殖 | 第66-68页 |
| 6.3.2 台盼蓝染色结果 | 第68-69页 |
| 6.3.3 荷瘤鼠体重和瘤体积变化及相对肿瘤增殖率 | 第69-70页 |
| 6.3.4 瘤重 | 第70-71页 |
| 6.3.5 瘤组织HE染色结果 | 第71页 |
| 6.3.6 免疫组化分析 | 第71-72页 |
| 6.4 讨论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-75页 |
| 第三部分 全文总结 | 第75-78页 |
| 附一 | 第78-79页 |
| 攻读硕士期间发表的论文及科研成果 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
