| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词 | 第8-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-17页 |
| 1.1 鱼类弧菌病病原致病机制的研究进展 | 第11-15页 |
| 1.1.1 致病性弧菌的毒力因子 | 第11-13页 |
| 1.1.2 Ⅲ型分泌系统 | 第13-15页 |
| 1.2 实验技术路线 | 第15-16页 |
| 1.3 研究的目的意义 | 第16-17页 |
| 2 溶藻弧菌HY9901 T3SS效应蛋白Va1686的基因克隆和生物信息学分析 | 第17-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 质粒载体及其他试剂 | 第17页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.4 主要溶液和试剂的配制 | 第18页 |
| 2.1.5 生物信息学分析所用软件 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-20页 |
| 2.2.1 溶藻弧菌总DNA的提取 | 第19页 |
| 2.2.2 溶藻弧菌va1686基因片段的扩增 | 第19页 |
| 2.2.3 生物信息学分析 | 第19-20页 |
| 2.3 结果 | 第20-25页 |
| 2.3.1 va1686基因的克隆 | 第20页 |
| 2.3.2 理化性质和序列分析 | 第20-21页 |
| 2.3.3 同源性分析 | 第21-23页 |
| 2.3.4 Va1686的功能域及高级结构的预测 | 第23页 |
| 2.3.5 Va1686的B细胞抗原表位预测 | 第23-24页 |
| 2.3.6 三级结构预测 | 第24-25页 |
| 2.4 讨论 | 第25-27页 |
| 3 溶藻弧菌HY9901 va1686基因的缺失株构建和生物学表型分析 | 第27-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 3.1.1 菌株 | 第27页 |
| 3.1.2 质粒 | 第27页 |
| 3.1.3 实验动物 | 第27页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第27页 |
| 3.1.5 主要试剂 | 第27页 |
| 3.1.6 主要溶液和试剂的配制 | 第27-28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-33页 |
| 3.2.1 溶藻弧菌HY9901 va1686基因的缺失株构建 | 第28-30页 |
| 3.2.2 互补株的构建 | 第30-31页 |
| 3.2.3 生物学表型分析 | 第31-33页 |
| 3.3 结果 | 第33-40页 |
| 3.3.1 va1686基因的缺失株构建 | 第33-36页 |
| 3.3.2 回补株构建 | 第36-38页 |
| 3.3.3 生物学表型分析 | 第38-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-42页 |
| 4 溶藻弧菌HY9901 T3SS效应蛋白Va1686致鱼类细胞的死亡 | 第42-50页 |
| 4.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 4.1.1 菌株及细胞系 | 第42页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第42页 |
| 4.1.4 主要试剂 | 第42-43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-45页 |
| 4.2.1 细胞传代培养 | 第43页 |
| 4.2.2 细胞感染实验 | 第43-44页 |
| 4.2.3 caspase-3实验 | 第44-45页 |
| 4.2.4 LDH实验 | 第45页 |
| 4.3 结果 | 第45-48页 |
| 4.3.1 细胞感染 | 第45-46页 |
| 4.3.2 caspase-3水平检测 | 第46-47页 |
| 4.3.3 LDH水平检测 | 第47-48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61-62页 |
| 指导教师简介 | 第62-63页 |
