摘要 | 第4-7页 |
ABSTRACT | 第7-9页 |
缩略词表 | 第13-15页 |
引言 | 第15-17页 |
第一部分 探讨 4.1R对DC细胞生物功能的影响 | 第17-45页 |
1.1 前言 | 第17页 |
1.2 材料 | 第17-23页 |
1.2.1 主要试剂 | 第17-19页 |
1.2.2 仪器设备 | 第19-20页 |
1.2.3 主要溶剂的配制 | 第20-23页 |
1.3 方法 | 第23-32页 |
1.3.1 引物设计 | 第23页 |
1.3.2 基因 4.1R过表达载体的构建 | 第23-27页 |
1.3.4 细胞培养和转染 | 第27页 |
1.3.5 mRNA的提取及逆转录反应 | 第27-28页 |
1.3.6 荧光定量PCR | 第28-29页 |
1.3.7 蛋白质的提取和BCA法测定蛋白浓度 | 第29页 |
1.3.8 免疫印迹杂交法 | 第29-31页 |
1.3.9 细胞膜表面表达分子及表面共刺激的分子的检测(直接标记法) | 第31页 |
1.3.10 细胞划痕实验 | 第31页 |
1.3.11 细胞小室实验 | 第31-32页 |
1.3.12 统计学分析 | 第32页 |
1.4 结果 | 第32-41页 |
1.4.1 成功构建 4.1R-Flag与 4.1R-EGFP过表达质粒 | 第32-33页 |
1.4.2 成功构建 4.1R过表达及沉默稳定株(RT-PCR验证) | 第33-34页 |
1.4.3 成功构建 4.1R过表达及沉默稳定株(WB验证) | 第34-35页 |
1.4.4 基因 4.1R过表达与沉默对DC细胞形态的影响 | 第35-36页 |
1.4.5 基因 4.1R过表达与沉默对DC表面分子MHCII及表面共刺激分子CD80、CD86的影响 | 第36-39页 |
1.4.6 基因 4.1R过表达与沉默对DC细胞迁移的影响(细胞划痕实验) | 第39页 |
1.4.7 基因 4.1R过表达与沉默对DC细胞迁移的影响(Transwell实验) | 第39-41页 |
讨论 | 第41-43页 |
小结 | 第43-45页 |
第二部分 探讨 4.1R在感染致膈肌无力模型中的表达及意义 | 第45-57页 |
2.1 前言 | 第45页 |
2.2 材料及试剂 | 第45-46页 |
2.2.1 主要材料和试剂 | 第45-46页 |
2.2.2 仪器设备 | 第46页 |
2.2.3 主要溶液的配制 | 第46页 |
2.3 方法 | 第46-48页 |
2.3.1 RT-PCR引物的设计与合成 | 第46页 |
2.3.2 mRNA的提取及反转录成cDNA | 第46页 |
2.3.3 蛋白的提取及BCA测蛋白浓度 | 第46页 |
2.3.4 免疫印迹杂交 | 第46页 |
2.3.5 免疫组织化学染色 | 第46-47页 |
2.3.6 细胞免疫组化(DAB显色) | 第47页 |
2.3.7 统计学分析方法 | 第47-48页 |
2.4 结果 | 第48-53页 |
2.4.1 4.1R在膈肌无力模型中mRNA水平的表达 | 第48页 |
2.4.2 蛋白质 4.1R在膈肌无力模型中的表达 | 第48-49页 |
2.4.3 蛋白质 4.1R明显促进了肌肉收缩蛋白的表达 | 第49-50页 |
2.4.5 沉默 4.1R后肌肉乙酰胆碱受体在C2C12细胞的表达 | 第50-53页 |
讨论 | 第53-55页 |
小结 | 第55-57页 |
总结 | 第57-59页 |
参考文献 | 第59-61页 |
综述 | 第61-73页 |
参考文献 | 第67-73页 |
致谢 | 第73-75页 |
在读期间参加的学术会议及研究成果 | 第75-76页 |