| 摘要 | 第7-8页 |
| 前言 | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第9-20页 |
| 1 猪应激综合症(PSS)的研究进展 | 第9-15页 |
| 1.1 猪应激综合症(PSS)致病基因的定位 | 第9-10页 |
| 1.2 猪应激综合症(PSS)的致病机理 | 第10-11页 |
| 1.3 氟烷基因的危害 | 第11-12页 |
| 1.3.1 氟烷基因对肉质的影响 | 第11页 |
| 1.3.2 氟烷基因对猪繁殖性能的影响 | 第11-12页 |
| 1.4 猪应激综合症检测方法的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.4.1 氟烷测验 | 第12-13页 |
| 1.4.2 CK血清测定法 | 第13-14页 |
| 1.4.3 血型与同工酶型鉴别 | 第14页 |
| 1.4.4 探针检测法 | 第14页 |
| 1.4.5 PCR-RFLP法 | 第14-15页 |
| 1.4.6 PCR-SSCP法 | 第15页 |
| 2 高分辨率熔解曲线技术简介 | 第15-20页 |
| 2.1 HRM的技术原理 | 第16页 |
| 2.2 高分辨率熔解曲线的技术基础及对硬件要求 | 第16-17页 |
| 2.2.1 对仪器设备自身温差的要求 | 第16-17页 |
| 2.2.2 对仪器设备温度分辨率的要求 | 第17页 |
| 2.2.3 PCR体系与条件的要求 | 第17页 |
| 2.3 HRM小片段法及应用 | 第17-18页 |
| 2.4 HRM非标记探针法及应用 | 第18-20页 |
| 实验一 C/C型和T/T型两种标准质粒的扩大培养 | 第20-23页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第20-21页 |
| 1.1 样品 | 第20页 |
| 1.2 试剂及试剂盒 | 第20页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第20-21页 |
| 2 方法 | 第21-22页 |
| 2.1 标准质粒的扩大培养 | 第21页 |
| 2.2 标准质粒的提取 | 第21-22页 |
| 2.3 杂合型质粒的构建 | 第22页 |
| 3 结果与分析 | 第22页 |
| 4 小结 | 第22-23页 |
| 实验二 PSS RYR1基因HRM小片段检测方法的建立 | 第23-32页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第23页 |
| 1.1 质粒 | 第23页 |
| 1.2 样品 | 第23页 |
| 1.3 试剂及试剂盒 | 第23页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-27页 |
| 2.1 猪尾组织DNA的提取及检测 | 第23-24页 |
| 2.2 引物的设计合成 | 第24-26页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第24-25页 |
| 2.2.2 HRM小片段法目的基因的扩增 | 第25-26页 |
| 2.3 HRM小片段法检测PSS方法的初步建立 | 第26-27页 |
| 2.3.1 PCR反应条件的优化 | 第26-27页 |
| 2.3.2 HRM的分型过程 | 第27页 |
| 2.4 猪基因组样品DNA的检测 | 第27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-31页 |
| 3.1 猪基因组DNA电泳结果 | 第27-28页 |
| 3.2 PCR扩增电泳结果 | 第28页 |
| 3.3 退火温度的优化结果 | 第28-29页 |
| 3.4 引物的优化结果 | 第29页 |
| 3.5 样品检测结果 | 第29-31页 |
| 4 小结 | 第31-32页 |
| 实验三 PSS RYR1基因HRM非标记性探针检测方法的建立 | 第32-40页 |
| 1 实验材料及试剂 | 第32页 |
| 1.1 质粒 | 第32页 |
| 1.2 样品 | 第32页 |
| 1.3 试剂及试剂盒 | 第32页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-35页 |
| 2.1 引物与探针的设计合成 | 第32-33页 |
| 2.2 HRM探针法目的基因的扩增 | 第33-34页 |
| 2.3 HRM非标记性探针法检测RYR1的初步建立 | 第34-35页 |
| 2.3.1 反应条件的优化 | 第35页 |
| 2.3.2 HRM分型过程 | 第35页 |
| 2.4 猪尾组织基因组DNA的检测 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-39页 |
| 3.1 PCR扩增电泳结果 | 第35-36页 |
| 3.2 退火温度的优化结果 | 第36-37页 |
| 3.3 不对称PCR反应体系优化结果 | 第37页 |
| 3.3.1 上游引物浓度的确定 | 第37页 |
| 3.3.2 上游引物与下游引物比例的确定 | 第37页 |
| 3.4 样品检测结果 | 第37-39页 |
| 4 小结 | 第39-40页 |
| 实验四 PSS RYR1基因的PCR-RFLP检测 | 第40-44页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第40页 |
| 1.1 样品 | 第40页 |
| 1.2 试剂及试剂盒 | 第40页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-42页 |
| 2.1 RYR1的PCR扩增 | 第40-41页 |
| 2.1.1 引物的合成 | 第40页 |
| 2.1.2 PCR反应体系 | 第40-41页 |
| 2.2 RFLP分析 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-43页 |
| 3.1 PCR电泳结果 | 第42-43页 |
| 3.2 酶切电泳结果 | 第43页 |
| 4 小结 | 第43-44页 |
| 讨论 | 第44-47页 |
| 1. 检测猪应激综合症PSS方法中标准质粒的构建及意义 | 第44页 |
| 2 建立HRM检测PSS的意义 | 第44-45页 |
| 3. HRM小片段法与非标记探针法的比较 | 第45-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| Abstract | 第53页 |
| 致谢 | 第55页 |
