| 摘要 | 第2-3页 |
| ABSTRACT | 第3-4页 |
| 符号说明 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-19页 |
| 1 引言 | 第9页 |
| 2 水稻耐冷研究 | 第9-17页 |
| 2.1 水稻苗期冷害鉴定方法及评价指标 | 第9-11页 |
| 2.2 水稻耐冷QTL研究进展 | 第11-16页 |
| 2.2.1 芽期 | 第11页 |
| 2.2.2 苗期 | 第11-13页 |
| 2.2.3 成熟期 | 第13页 |
| 2.2.4 水稻耐冷性基因 | 第13-16页 |
| 2.3 水稻耐冷的分子机理 | 第16-17页 |
| 2.3.1 CBF途径 | 第16-17页 |
| 2.3.2 MYB途径 | 第17页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第17-19页 |
| 第二章 qRC10-2基因功能验证 | 第19-43页 |
| 1 前言 | 第19-20页 |
| 2 材料与试剂 | 第20-22页 |
| 2.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.2 细菌菌株及质粒载体 | 第20页 |
| 2.3 化学试剂 | 第20页 |
| 2.4 水稻转化中使用的培养基配方 | 第20-22页 |
| 2.5 水稻营养液配方 | 第22页 |
| 3 实验方法 | 第22-29页 |
| 3.1 目的基因qRC10-2的序列分析 | 第22-23页 |
| 3.2 目的基因qRC10-2的亚细胞定位 | 第23-25页 |
| 3.2.1 东乡野生稻基因组DNA的提取 | 第23页 |
| 3.2.2 目的片段PCR扩增 | 第23-24页 |
| 3.2.3 扩增片段纯化 | 第24页 |
| 3.2.4 亚细胞定位载体构建 | 第24页 |
| 3.2.5 农杆菌GV3101感受态细胞的制备及转化 | 第24-25页 |
| 3.2.6 农杆菌注射烟草和观察 | 第25页 |
| 3.3 含目的基因的载体构建 | 第25页 |
| 3.4 载体质粒DNA的提取 | 第25页 |
| 3.5 农杆菌感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 3.6 载体质粒转化农杆菌 | 第25-26页 |
| 3.7 农杆菌介导法转化水稻 | 第26-27页 |
| 3.7.1 外植体灭菌处理 | 第26页 |
| 3.7.2 愈伤组织诱导 | 第26页 |
| 3.7.3 农杆菌的培养及与愈伤组织的共培养 | 第26页 |
| 3.7.4 抗性愈伤组织的筛选及植株再生 | 第26-27页 |
| 3.8 转基因T_0代植株的PCR检测 | 第27-28页 |
| 3.9 转基因T_1代植株存活率测定 | 第28页 |
| 3.10 转基因T_2代的纯系鉴定和存活率测定 | 第28-29页 |
| 3.11 转基因T_2代纯系植株果胶测定 | 第29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-40页 |
| 4.1 东乡野生稻耐冷基因qRC10-2的序列信息 | 第29-30页 |
| 4.2 qRC10-2基因的亚细胞定位 | 第30-31页 |
| 4.3 过表达和干扰载体转基因植株的获得 | 第31-32页 |
| 4.4 过表达和干扰载体转基因阳性植株的获得 | 第32-33页 |
| 4.4.1 转基因T_0代植株的PCR检测 | 第32-33页 |
| 4.5 转基因T_1代植株耐冷表型和存活率 | 第33-37页 |
| 4.5.1 转基因T_1代植株耐冷表型 | 第33-36页 |
| 4.5.2 转基因T_1代及已有T_2代纯系存活率 | 第36-37页 |
| 4.6 转基因T_2代纯系 | 第37-39页 |
| 4.6.1 转基因T_2代纯系鉴定 | 第37-38页 |
| 4.6.2 T_2代纯系耐冷表型 | 第38-39页 |
| 4.7 水稻根部果胶含量的测定 | 第39-40页 |
| 5 讨论 | 第40-43页 |
| 5.1 转化技术和阳性T_0代植株的鉴定 | 第40-41页 |
| 5.2 籼稻和粳稻中qRC10-2基因的功能 | 第41-43页 |
| 第三章 基于转录组分析qRC10-2的耐冷调控途径 | 第43-50页 |
| 1 前言 | 第43页 |
| 2 材料与试剂 | 第43-44页 |
| 2.1 植物材料 | 第43页 |
| 2.2 试剂 | 第43-44页 |
| 3 实验方法 | 第44页 |
| 3.1 qRC10-2基因的表达谱测序 | 第44页 |
| 4 结果与分析 | 第44-48页 |
| 4.1 对照和过表达转基因株系的表达谱 | 第44-45页 |
| 4.2 qRC10-2基因的DGE测序结果 | 第45-46页 |
| 4.3 qRC10-2基因表达谱中与植物冷胁迫相关基因 | 第46-48页 |
| 5 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 论文发表、科研创新及国家专利申请 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
