| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第1章 绪论 | 第16-28页 |
| 1.1 前言 | 第16页 |
| 1.2 青枯菌概述 | 第16-18页 |
| 1.2.1 青枯菌描述及分类 | 第17页 |
| 1.2.2 青枯菌寄主及致病机理 | 第17-18页 |
| 1.3 桑树青枯病概述 | 第18-19页 |
| 1.3.1 桑树青枯病病原描述 | 第18-19页 |
| 1.3.2 桑树青枯病发病规律及防治 | 第19页 |
| 1.4 青枯菌检测研究进展 | 第19-22页 |
| 1.4.1 培养基分离法 | 第20页 |
| 1.4.2 核酸分子杂交 | 第20-21页 |
| 1.4.3 基于PCR技术的检测 | 第21-22页 |
| 1.5 PMA用于活菌检测技术概论 | 第22-25页 |
| 1.5.1 PMA的作用机理 | 第23-24页 |
| 1.5.2 PMA‐q PCR用于活菌检测研究进展 | 第24-25页 |
| 1.6 本课题的研究意义和主要内容 | 第25-28页 |
| 1.6.1 研究的目的与意义 | 第25页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第25-27页 |
| 1.6.3 技术路线 | 第27-28页 |
| 第2章 桑青枯病病原菌的分离、鉴定 | 第28-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 样品来源 | 第28页 |
| 2.1.2 培养基 | 第28页 |
| 2.1.3 主要溶液配制及试剂盒 | 第28-29页 |
| 2.1.4 主要实验仪器和设备 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-35页 |
| 2.2.1 病原菌的分离 | 第30页 |
| 2.2.2 病原菌回接致病验证 | 第30页 |
| 2.2.3 病原菌 16S r DNA基因PCR扩增 | 第30-32页 |
| 2.2.4 PCR产物回收及测序 | 第32-34页 |
| 2.2.5 序列比对分析 | 第34-35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-38页 |
| 2.3.1 病原菌分离及回复致病结果 | 第35-36页 |
| 2.3.2 病原菌 16S r DNA序列扩增及比对结果 | 第36-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38页 |
| 2.5 本章小结 | 第38-40页 |
| 第3章 桑青枯菌特异性检测引物的设计及q PCR方法的建立 | 第40-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第40页 |
| 3.1.2 主要药品和试剂 | 第40页 |
| 3.1.3 主要仪器与设备 | 第40-41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-47页 |
| 3.2.1 特异性引物的设计与合成 | 第41页 |
| 3.2.2 引物的特异性验证 | 第41-45页 |
| 3.2.3 荧光定量PCR反应程序 | 第45-46页 |
| 3.2.4 常规PCR和q PCR的检测灵敏性 | 第46页 |
| 3.2.5 q PCR对土壤样品的检测 | 第46-47页 |
| 3.3 结果与分析 | 第47-55页 |
| 3.3.1 引物设计结果 | 第47页 |
| 3.3.2 引物的特异性验证 | 第47-49页 |
| 3.3.3 常规PCR和q PCR的检测灵敏性 | 第49-54页 |
| 3.3.4 q PCR对土壤样品的检测 | 第54-55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-56页 |
| 3.5 本章小结 | 第56-59页 |
| 第4章 基于PMA-q PCR的青枯菌5号小种活体检测技术的建立 | 第59-71页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 4.1.1 主要药品及试剂 | 第59页 |
| 4.1.2 主要仪器与设备 | 第59-60页 |
| 4.2 实验方法 | 第60-63页 |
| 4.2.1 桑青枯菌菌悬液的制备 | 第60页 |
| 4.2.2 引物的合成与设计 | 第60页 |
| 4.2.3 荧光定量PCR反应程序 | 第60页 |
| 4.2.4 PMA预处理条件的优化 | 第60-62页 |
| 4.2.5 PMA‐q PCR的检测限 | 第62页 |
| 4.2.6 PMA‐q PCR对活死菌混合体系的检测 | 第62页 |
| 4.2.7 数据分析 | 第62-63页 |
| 4.3 结果与分析 | 第63-67页 |
| 4.3.1 PMA预处理的最优浓度 | 第63-64页 |
| 4.3.2 PMA预处理的最优孵育时间 | 第64页 |
| 4.3.3 PMA预处理的最优曝光时间 | 第64-65页 |
| 4.3.4 PMA‐q PCR的检测限 | 第65-66页 |
| 4.3.5 PMA‐q PCR对活死菌混合体系的检测 | 第66-67页 |
| 4.4 讨论 | 第67-68页 |
| 4.5 本章小结 | 第68-71页 |
| 结论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 附录 | 第79-83页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
