| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-19页 |
| 1.1 L-丝氨酸及其功用 | 第9-10页 |
| 1.1.1 L-丝氨酸 | 第9页 |
| 1.1.2 L-丝氨酸的功能与用途 | 第9-10页 |
| 1.2 L-丝氨酸合成方法 | 第10-11页 |
| 1.2.1 蛋白水解液提取法 | 第10页 |
| 1.2.2 化学合成法 | 第10页 |
| 1.2.3 酶法 | 第10页 |
| 1.2.4 微生物发酵法 | 第10-11页 |
| 1.3 L-丝氨酸的相关代谢过程 | 第11-13页 |
| 1.3.1 L-丝氨酸的合成途径及其调节 | 第11-12页 |
| 1.3.2 L-丝氨酸的分解途径及其调节 | 第12-13页 |
| 1.3.3 L-丝氨酸的转运及其调节 | 第13页 |
| 1.4 微生物发酵法生产 L-丝氨酸研究现状 | 第13-16页 |
| 1.4.1 前体添加发酵法生产 L-丝氨酸 | 第13-14页 |
| 1.4.2 直接发酵法生产 L-丝氨酸 | 第14-16页 |
| 1.5 提高 L-丝氨酸生物合成的代谢工程改造策略 | 第16-17页 |
| 1.6 本课题研究的内容与意义 | 第17-19页 |
| 1.6.1 本课题的研究内容 | 第17页 |
| 1.6.2 本课题研究的意义 | 第17-19页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第19-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-26页 |
| 2.1.1 实验菌种和质粒 | 第19-21页 |
| 2.1.2 主要的实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.3 实验药品 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要溶液配置 | 第23-26页 |
| 2.1.5 培养基 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-41页 |
| 2.2.1 菌体的培养与发酵 | 第26-27页 |
| 2.2.2 大肠杆菌及谷氨酸棒状杆菌染色体 DNA 的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.3 碱裂解法提取大肠杆菌质粒 | 第28页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态的制备及转化（CaCl_2法） | 第28-29页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态的制备及转化（电转化） | 第29-30页 |
| 2.2.6 PCR 扩增基因 | 第30-32页 |
| 2.2.7 重组 PCR 反应体系 | 第32页 |
| 2.2.8 菌落（液）PCR | 第32-33页 |
| 2.2.9 PCR 产物纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.10 琼脂糖凝胶电泳 | 第34页 |
| 2.2.11 DNA 片段切胶回收 | 第34-35页 |
| 2.2.12 DNA 的酶切、去磷酸化和连接 | 第35-36页 |
| 2.2.13 目的基因敲除方法 | 第36-39页 |
| 2.2.14 发酵菌体浓度、葡萄糖及发酵产物的测定 | 第39页 |
| 2.2.15 SHMT 酶活的测定 | 第39-40页 |
| 2.2.16 引物的设计和基因测序 | 第40-41页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第41-63页 |
| 3.1 sdaA、sdaB 和 tdcG 基因的敲除 | 第41-47页 |
| 3.1.1 sdaA、sdaB 和 tdcG 基因敲除片段的构建 | 第41-45页 |
| 3.1.2 采用大肠杆菌无痕敲除技术构建敲除工程菌 | 第45-47页 |
| 3.2 L-丝氨酸从头合成途径的过表达 | 第47-49页 |
| 3.2.1 以 p5C 为载体的过表达质粒的构建 | 第47-49页 |
| 3.2.2 电转化得到过表达菌株 | 第49页 |
| 3.3 gcvP 基因的敲除 | 第49-52页 |
| 3.3.1 gcvP 基因敲除相关片段的扩增及构建 | 第50-51页 |
| 3.3.2 采用大肠杆菌无痕敲除技术构建敲除 gcvP 的工程菌 | 第51-52页 |
| 3.4 微调 glyA 基因 | 第52-55页 |
| 3.4.1 设计 glyA 基因的 RBS 文库 | 第52-53页 |
| 3.4.2 置换 glyA 基因自身的 RBS 序列 | 第53-55页 |
| 3.5 工程菌与野生菌的摇瓶发酵表征 | 第55-63页 |
| 3.5.1 sdaA、sdaB 及 tdcG 基因敲除菌生长和积累 L-丝氨酸发酵表征 | 第55-56页 |
| 3.5.2 过表达合成途径对大肠杆菌产 L-丝氨酸的作用 | 第56-58页 |
| 3.5.3 阻断甘氨酸裂解对大肠杆菌生产 L-丝氨酸的作用 | 第58页 |
| 3.5.4 微调 glyA 基因对大肠杆菌产 L-丝氨酸的发酵表征 | 第58-61页 |
| 3.5.5 工程菌的发酵罐发酵试验 | 第61-63页 |
| 第四章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 4.1 结论 | 第63-64页 |
| 4.2 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
