| 中文摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-23页 |
| 1.1 植物中的钙传感蛋白 | 第13页 |
| 1.2 CDPK超家族的分类 | 第13-14页 |
| 1.3 植物中的钙依赖蛋白激酶 | 第14-21页 |
| 1.3.1 CDPK的结构特征 | 第14-15页 |
| 1.3.2 CDPK的调控机制 | 第15-16页 |
| 1.3.3 CDPK的表达特性 | 第16页 |
| 1.3.4 CDPK的亚细胞定位 | 第16-17页 |
| 1.3.5 CDPK的底物、磷酸化位点和抑制剂 | 第17-18页 |
| 1.3.6 CDPK的调控 | 第18-19页 |
| 1.3.6.1 转录水平调控 | 第18-19页 |
| 1.3.6.2 磷酸化作用 | 第19页 |
| 1.3.6.3 脂类调控 | 第19页 |
| 1.3.7 CDPK参与调控非生物胁迫响应 | 第19-20页 |
| 1.3.8 CDPK参与调控生物胁迫响应 | 第20页 |
| 1.3.9 CDPK参与调节气孔运动 | 第20-21页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-30页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 植物材料培养与处理 | 第23-24页 |
| 2.1.3 菌株与质粒 | 第24页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第24-25页 |
| 2.1.5 酶与各种生化试剂 | 第25页 |
| 2.1.6 培养基 | 第25-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-43页 |
| 2.2.1 植物材料总RNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.2 反转录cDNA第一链的合成 | 第30-31页 |
| 2.2.3 ZmCPK4基因的克隆 | 第31页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶回收 | 第31-32页 |
| 2.2.5 连接反应 | 第32页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第32-33页 |
| 2.2.6.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.6.2 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第33页 |
| 2.2.7 DNA序列测定 | 第33页 |
| 2.2.8 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.9 植物基因组DNA提取 | 第34页 |
| 2.2.10 荧光定量PCR | 第34页 |
| 2.2.11 表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.2.12 质粒的纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.13 基因枪轰击法 | 第36-37页 |
| 2.2.13.1 基因枪设备 | 第36页 |
| 2.2.13.2 金粉原料的准备 | 第36页 |
| 2.2.13.3 DNA包裹金粉微粒 | 第36-37页 |
| 2.2.13.4 基因枪轰击操作 | 第37页 |
| 2.2.14 根癌农杆菌介导的转化 | 第37-38页 |
| 2.2.14.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第37页 |
| 2.2.14.2 冻融法转化农杆菌 | 第37-38页 |
| 2.2.15 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第38-39页 |
| 2.2.15.1 拟南芥转化 | 第38页 |
| 2.2.15.2 转基因拟南芥鉴定 | 第38-39页 |
| 2.2.16 农杆菌介导的烟草转化 | 第39-40页 |
| 2.2.16.1 烟草转化 | 第39页 |
| 2.2.16.2 转基因烟草植株鉴定 | 第39-40页 |
| 2.2.17 基因枪法玉米遗传转化 | 第40页 |
| 2.2.17.1 玉米转化 | 第40页 |
| 2.2.17.2 转化愈伤组织的筛选和植株再生 | 第40页 |
| 2.2.18 TMV和PVX病原菌的侵染 | 第40页 |
| 2.2.19 DAB和NBT染色 | 第40-41页 |
| 2.2.20 台盼蓝染色 | 第41页 |
| 2.2.21 拟南芥植株叶片气孔孔径的观察与测定 | 第41页 |
| 2.2.22 干旱胁迫处理及失水率测定 | 第41页 |
| 2.2.23 过氧化物酶(POD)活性测定 | 第41页 |
| 2.2.24 游离脯氨酸含量测定 | 第41-42页 |
| 2.2.25 可溶性糖含量测定 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-61页 |
| 3.1 钙依赖蛋白激酶ZmCPK4基因的分离 | 第43页 |
| 3.2 ZmCPK4基因的序列分析 | 第43-46页 |
| 3.2.1 ZmCPK4全长cDNA分析 | 第43页 |
| 3.2.2 ZmCPK4编码蛋白质序列分析 | 第43-44页 |
| 3.2.3 ZmCPK4序列系统发生分析 | 第44-46页 |
| 3.3 ZmCPK4的亚细胞定位 | 第46-47页 |
| 3.4 ZmCPK4在玉米中的表达分析 | 第47-48页 |
| 3.4.1 ZmCPK4在玉米不同部位的表达分析 | 第47页 |
| 3.4.2 ZmCPK4在各种胁迫和不同信号分子处理下的表达分析 | 第47-48页 |
| 3.5 ZmCPK4基因在拟南芥中的功能分析 | 第48-55页 |
| 3.5.1 转基因表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.5.2 转基因拟南芥的鉴定 | 第49-50页 |
| 3.5.3 过表达ZmCPK4增强转基因拟南芥种子萌发阶段对ABA的敏感性 | 第50-51页 |
| 3.5.4 过表达ZmCPK4增强转基因拟南芥幼苗对ABA的敏感性 | 第51-52页 |
| 3.5.5 过表达ZmCPK4增强转基因拟南芥干旱胁迫下气孔对ABA的敏感性及保水能力 | 第52-53页 |
| 3.5.6 过表达ZmCPK4改变ABA响应基因的表达 | 第53-54页 |
| 3.5.7 过表达ZmCPK4使ABA处理下转基因拟南芥的脯氨酸含量提高 | 第54-55页 |
| 3.6 ZmCPK4基因在烟草中的功能分析 | 第55-58页 |
| 3.6.1 转基因表达载体的构建 | 第55页 |
| 3.6.2 转基因烟草的鉴定 | 第55页 |
| 3.6.3 过表达ZmCPK4使转基因烟草对TMV和PVX病毒的敏感性增加 | 第55-57页 |
| 3.6.4 ZmCPK4调控ROS的积累 | 第57页 |
| 3.6.5 过表达ZmCPK4使转基因烟草的抗氧化能力降低 | 第57-58页 |
| 3.7 ZmCPK4基因在玉米中的遗传转化 | 第58-61页 |
| 3.7.1 基因枪瞬时表达实验 | 第58-59页 |
| 3.7.2 玉米遗传转化 | 第59-60页 |
| 3.7.3 转基因玉米幼苗的检测 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-65页 |
| 5 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第76页 |
