| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 综述 | 第11-22页 |
| 1.1 小麦条锈菌研究概况 | 第11-12页 |
| 1.1.1 小麦条条锈菌的危害及分布 | 第11页 |
| 1.1.2 小麦条锈菌的生物学特征及其侵染过程 | 第11-12页 |
| 1.1.3 小麦条锈病的研究现状 | 第12页 |
| 1.2 条锈菌夏孢子萌发过程中脂类物质的合成和代谢 | 第12-13页 |
| 1.3 乙醛酸循环及异柠檬酸裂解酶 | 第13-17页 |
| 1.3.1 乙醛酸循环 | 第13-15页 |
| 1.3.2 异柠檬酸裂解酶基因 ICL 的作用及研究概况 | 第15-16页 |
| 1.3.3 研究异柠檬酸裂合酶基因 ICL 的意义 | 第16-17页 |
| 1.4 磷酸戊糖途径及葡萄糖六磷酸脱氢酶基因 G6PDH | 第17-20页 |
| 1.4.1 磷酸戊糖途径及对细胞生存的必要性 | 第17-18页 |
| 1.4.2 磷酸戊糖途径及葡萄糖六磷酸脱氢酶的研究进展 | 第18页 |
| 1.4.3 外源基因在酿酒酵母中的表达研究概况 | 第18-20页 |
| 1.4.3.1 酿酒酵母表达系统的宿主-酿酒酵母菌 | 第19页 |
| 1.4.3.2 酿酒酵母表达系统中载体的种类 | 第19页 |
| 1.4.3.3 外源基因在酿酒酵母中的表达 | 第19-20页 |
| 1.5 本研究的目的意义和技术路线 | 第20-22页 |
| 1.5.1 目的意义 | 第20-21页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第21页 |
| 1.5.2.1 小麦条锈菌 PsICL1 的功能分析 | 第21页 |
| 1.5.2.2 小麦条锈菌 PsG6DPH1 的功能分析 | 第21页 |
| 1.5.3 实验技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 小麦条锈菌 PsICL1 的克隆、表达及功能分析 | 第22-49页 |
| 2.1 材料、试剂及仪器 | 第22-24页 |
| 2.1.1 试验材料及菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 载体及目的基因 | 第22页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.5 引物及序列 | 第23页 |
| 2.1.6 抗生素的配制 | 第23页 |
| 2.1.7 酵母感受态细胞制备试剂 | 第23页 |
| 2.1.8 缓冲液的配制 | 第23-24页 |
| 2.1.9 SDS-PAGE 所有试剂及 westernblot 所用试剂配制 | 第24页 |
| 2.1.10 培养基 | 第24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-35页 |
| 2.2.1 实验材料的准备和取样 | 第24-25页 |
| 2.2.2 组织总 RNA 的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.3 大肠杆菌超级感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 2.2.4 cDNA 第一条链的合成 | 第26-27页 |
| 2.2.5 目的基因 PsICL1 的克隆 | 第27-28页 |
| 2.2.6 目的基因 PsICL1 的生物信息学分析 | 第28-29页 |
| 2.2.7 Real-time PCR 检测表达趋势 | 第29-30页 |
| 2.2.8 夏孢子芽管的萌发长度统计 | 第30页 |
| 2.2.9 夏孢子萌发过程中脂肪的共聚焦观察 | 第30页 |
| 2.2.10 夏孢子萌发过程中异柠檬酸裂解酶活性的测定 | 第30-31页 |
| 2.2.11 夏孢子萌发过程中总还原糖含量的变化 | 第31-32页 |
| 2.2.12 抑制剂 3-NP（3-硝基丙酸）对夏孢子萌发的影响 | 第32页 |
| 2.2.13 酿酒酵母的异源互补 | 第32-33页 |
| 2.2.13.1 表达质粒 pDR195-PsICL1 的构建 | 第32页 |
| 2.2.13.2 酿酒酵母感受态细胞的制备和转化 | 第32-33页 |
| 2.2.13.3 转化子的筛选与功能鉴定 | 第33页 |
| 2.2.14 PsIC1L 的原核表达 | 第33-35页 |
| 2.2.14.1 表达质粒 pGEX4T-1-PsICL1 的构建 | 第33页 |
| 2.2.14.2 融合表达质粒 pGEX4T-1-PsICL1 的诱导表达及 SDS-PAGE | 第33-35页 |
| 2.3 结果分析 | 第35-47页 |
| 2.3.1 总 RNA 的提取 | 第35页 |
| 2.3.2 小麦条锈菌 PsICL1 全长 ORF 的扩增及测序验证 | 第35-36页 |
| 2.3.3 氨基酸序列分析 | 第36-37页 |
| 2.3.4 序列相似性及进化树分析 | 第37-38页 |
| 2.3.5 实时定量 PCR 分析 | 第38-39页 |
| 2.3.6 夏孢子芽管的萌发长度统计 | 第39-40页 |
| 2.3.7 夏孢子萌发过程中脂肪的共聚焦观察 | 第40页 |
| 2.3.8 夏孢子萌发过程中异柠檬酸裂解酶活性的测定 | 第40-41页 |
| 2.3.9 夏孢子萌发过程中总还原糖含量的变化 | 第41-42页 |
| 2.3.10 抑制剂 3-NP（3-硝基丙酸）对夏孢子萌发的影响 | 第42-44页 |
| 2.3.11 酿酒酵母的异源互补 | 第44-46页 |
| 2.3.12 PsICL1 的原核表达 | 第46-47页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 小麦条锈菌 PsG6PDH1 基因的克隆、表达及功能分析 | 第49-64页 |
| 3.1 材料、试剂及仪器 | 第49-50页 |
| 3.1.1 试验材料及菌株 | 第49页 |
| 3.1.2 载体及目的基因 | 第49页 |
| 3.1.3 酶及生化试剂 | 第49页 |
| 3.1.4 仪器 | 第49页 |
| 3.1.5 引物及序列 | 第49页 |
| 3.1.6 缓冲液的配制 | 第49-50页 |
| 3.1.7 SDS-PAGE 所有试剂及 westernblot 所用试剂配制 | 第50页 |
| 3.1.8 培养基 | 第50页 |
| 3.2 试验方法 | 第50-54页 |
| 3.2.1 目的基因 PsG6PDH1 的克隆 | 第50页 |
| 3.2.2 目的基因 PsG6PDH1 的生物信息学分析 | 第50-51页 |
| 3.2.3 Real-time PCR 检测表达趋势 | 第51页 |
| 3.2.4 酿酒酵母的异源互补 | 第51-54页 |
| 3.2.4.1 表达质粒 pYES2.0- PsG6PDH1 的构建及鉴定 | 第51页 |
| 3.2.4.2 酿酒酵母感受态细胞的制备和转化 | 第51页 |
| 3.2.4.3 转化子的初步筛选 | 第51-52页 |
| 3.2.4.4 转化子的功能鉴定及对不同过氧化氢浓度的耐受性实验 | 第52页 |
| 3.2.4.5 PsG6PDH1 基因在酿酒酵母中的诱导表达 | 第52-53页 |
| 3.2.4.6 表达产物的 SDS-PAGE 电泳 | 第53页 |
| 3.2.4.7 表达产物的 westernblot 分析 | 第53页 |
| 3.2.4.8 表达产物的酶活测定分析 | 第53-54页 |
| 3.3 结果分析 | 第54-62页 |
| 3.3.1 总 RNA 的提取 | 第54页 |
| 3.3.2 小麦条锈菌 PsG6PDH1 全长 ORF 的扩增及测序验证 | 第54页 |
| 3.3.3 氨基酸序列分析 | 第54-55页 |
| 3.3.4 序列相似性及进化树分析 | 第55-56页 |
| 3.3.5 实时定量 PCR 分析 | 第56-57页 |
| 3.3.6 酿酒酵母的异源互补 | 第57-60页 |
| 3.3.7 PsG6PDH1 基因在酿酒酵母中的诱导表达及 westernblot 分析 | 第60-61页 |
| 3.3.8 PsG6PDH1 基因在酿酒酵母中的诱导表达的酶活测定分析 | 第61-62页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
