| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 符号说明 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-16页 |
| 2 慢病毒载体介导的肾胺酶基因沉默效率鉴定 | 第16-37页 |
| 2.1 引言 | 第16页 |
| 2.2 材料 | 第16-18页 |
| 2.2.1 实验对象 | 第16页 |
| 2.2.2 主要试剂与仪器 | 第16-18页 |
| 2.3 方法 | 第18-28页 |
| 2.3.1 主要试剂配制 | 第18-21页 |
| 2.3.2 H9C2心肌细胞培养 | 第21页 |
| 2.3.3 H9C2心肌细胞慢病毒转染预实验 | 第21-22页 |
| 2.3.4 H9C2心肌细胞慢病毒转染抑制效率鉴定 | 第22-25页 |
| 2.3.5 Wstern-Blot检测H9C2细胞肾胺酶蛋白的表达 | 第25-27页 |
| 2.3.6 统计学分析 | 第27-28页 |
| 2.4 结果 | 第28-35页 |
| 2.4.1 慢病毒载体信息 | 第28-29页 |
| 2.4.2 shRNA慢病毒序列测序结果 | 第29-30页 |
| 2.4.3 慢病毒转染H9C2细胞荧光照片 | 第30-34页 |
| 2.4.4 QPCR鉴定转染后各组肾胺酶基因表达情况 | 第34页 |
| 2.4.5 转染后第5天Western-Blot检测细胞肾胺酶蛋白表达情况 | 第34-35页 |
| 2.5 讨论 | 第35-36页 |
| 2.6 小结 | 第36-37页 |
| 3 SD大鼠心包腔注射慢病毒建立心肌肾胺酶基因沉默模型 | 第37-47页 |
| 3.0 引言 | 第37页 |
| 3.1 材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 研究对象及分组 | 第37页 |
| 3.1.2 主要仪器及试剂 | 第37-38页 |
| 3.2 方法 | 第38-42页 |
| 3.2.1 试剂配制 | 第38-39页 |
| 3.2.2 模型建立 | 第39页 |
| 3.2.3 心肌组织冰冻切片制作 | 第39-40页 |
| 3.2.4 心肌组织renalase基因表达水平检测 | 第40页 |
| 3.2.5 心肌组织reanlase蛋白表达水平检测 | 第40-42页 |
| 3.2.6 统计学分析 | 第42页 |
| 3.3 结果 | 第42-45页 |
| 3.3.1 心肌肾胺酶低表达模型建立情况 | 第42页 |
| 3.3.2 大鼠心包腔注射慢病毒后不同时间冰冻切片荧光照片 | 第42-44页 |
| 3.3.3 QPCR检测心肌组织肾胺酶基因表达 | 第44页 |
| 3.3.4 Western-Blot检测心肌第10d处死组心肌组织蛋白表达水平 | 第44-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-46页 |
| 3.5 小结 | 第46-47页 |
| 4 肾胺酶基因沉默及重组蛋白预处理对大鼠心肌I/R损伤的作用 | 第47-65页 |
| 4.1 引言 | 第47页 |
| 4.2 材料 | 第47-48页 |
| 4.2.1 研究对象及分组 | 第47页 |
| 4.2.2 主要试剂与仪器 | 第47-48页 |
| 4.3 方法 | 第48-54页 |
| 4.3.1 主要实验试剂配制 | 第48页 |
| 4.3.2 测量SD大鼠血压及体重 | 第48页 |
| 4.3.3 SD大鼠心包腔注射慢病毒液 | 第48-49页 |
| 4.3.4 心肌缺血再灌注损伤模型建立 | 第49-50页 |
| 4.3.5 心肌坏死面积测定 | 第50页 |
| 4.3.6 TUNEL方法检测细胞凋亡 | 第50-51页 |
| 4.3.7 心肌组织renalase基因表达水平检测 | 第51页 |
| 4.3.8 心肌组织reanlase蛋白表达水平检测 | 第51-52页 |
| 4.3.9 Elisa检测术前术后血浆renalase | 第52-53页 |
| 4.3.10 Elisa检测血浆NE变化 | 第53-54页 |
| 4.3.11 统计学分析 | 第54页 |
| 4.4 结果 | 第54-62页 |
| 4.4.1 各组大鼠术前术后体重、血压 | 第54-55页 |
| 4.4.2 心肌缺血再灌注模型建立情况 | 第55-56页 |
| 4.4.3 心肌坏死面积测定 | 第56-57页 |
| 4.4.4 TUNEL细胞凋亡检测结果 | 第57-59页 |
| 4.4.5 QPCR检测心肌细胞局部肾胺酶基因的表达 | 第59-60页 |
| 4.4.6 心肌组织Western-blot检测肾胺酶蛋白表达 | 第60-61页 |
| 4.4.7 血浆renalase及NE水平 | 第61-62页 |
| 4.5 讨论 | 第62-64页 |
| 4.6 小结 | 第64-65页 |
| 5 总结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 综述 | 第70-77页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 攻读学位期间的主要研究成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
