| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 阿维菌素及其毒性作用 | 第11-12页 |
| 1.2 DNA甲基化 | 第12-14页 |
| 1.2.1 DNA甲基化修饰 | 第12-13页 |
| 1.2.2 DNA去甲基化 | 第13页 |
| 1.2.3 DNA甲基化的生物功能 | 第13页 |
| 1.2.4 DNA甲基化对基因表达的调控 | 第13-14页 |
| 1.3 环境毒物对DNA甲基化的影响 | 第14-16页 |
| 1.3.1 有机化学毒物对DNA甲基化的影响 | 第14-15页 |
| 1.3.2 重金属中毒对DNA甲基化的影响 | 第15-16页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-22页 |
| 2.1 主要仪器与试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第17页 |
| 2.1.2 主要化学与生物试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 主要试剂的配置 | 第17-18页 |
| 2.2 实验动物饲养与处理 | 第18页 |
| 2.3 组织DNA总甲基化水平检测 | 第18-19页 |
| 2.3.1 组织DNA提取(酚-氯仿法) | 第18页 |
| 2.3.2 DNA的水解 | 第18-19页 |
| 2.3.3 高效液相色谱条件优化 | 第19页 |
| 2.3.4 标准曲线的绘制 | 第19页 |
| 2.3.5 回收率与精密度试验 | 第19页 |
| 2.3.6 高效液相色谱法检测样品的DNA总甲基化水平 | 第19页 |
| 2.4 王鸽DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、MBD2基因mRNA表达水平的检测 | 第19-21页 |
| 2.4.1 引物设计与合成 | 第19-20页 |
| 2.4.2 组织总RNA的抽提 | 第20页 |
| 2.4.3 反转录反应 | 第20页 |
| 2.4.4 实时PCR扩增 | 第20-21页 |
| 2.5 试验数据的分析与统计 | 第21-22页 |
| 3 结果与分析 | 第22-32页 |
| 3.1 HPLC检测基因组DNA甲基化方法的建立 | 第22-23页 |
| 3.1.1 实验条件的选择和优化结果 | 第22页 |
| 3.1.2 标准曲线和二元一次方程的建立 | 第22-23页 |
| 3.1.3 回收率与精密度的测定 | 第23页 |
| 3.2 HPLC检测组织基因组DNA甲基化结果 | 第23-26页 |
| 3.2.1 组织DNA提取结果 | 第23-24页 |
| 3.2.2 王鸽组织DNA色谱图 | 第24页 |
| 3.2.3 王鸽组织DNA甲基化检测结果 | 第24-26页 |
| 3.3 目的基因实时定量PCR检测方法的建立 | 第26-28页 |
| 3.3.1 组织RNA提取结果的鉴定 | 第26-27页 |
| 3.3.2 DNMT1、3A、3B,MBD2,β-actin基因实时检测方法的建立 | 第27-28页 |
| 3.4 阿维菌素对王鸽组织中DNMT1、3A、3B,MBD2 mRNA表达影响的检测 | 第28-32页 |
| 3.4.1 阿维菌素对王鸽肝脏组织中DNMT1、3A、3B表达影响的检测结果 | 第28页 |
| 3.4.2 阿维菌素对王鸽肾脏组织中DNMT1、3A、3B表达影响的检测结果 | 第28-29页 |
| 3.4.3 阿维菌素对王鸽心脏组织中DNMT1、3A、3B表达影响的检测结果 | 第29-30页 |
| 3.4.4 阿维菌素对王鸽脾脏组织中DNMT1、3A、3B表达影响的检测结果 | 第30页 |
| 3.4.5 阿维菌素对王鸽肝脏、肾脏、心脏、脾脏组织中MBD2 mRNA表达影响的检测结果 | 第30-32页 |
| 4 讨论 | 第32-37页 |
| 4.1 HPLC检测DNA总甲基化水平方法的建立 | 第32页 |
| 4.2 阿维菌素中毒对王鸽组织DNA总甲基化水平的影响 | 第32-33页 |
| 4.3 阿维菌素对王鸽组织DNMT1基因mRNA表达的影响 | 第33-34页 |
| 4.4 阿维菌素对王鸽组织DNMT3A、DNMT3B基因mRNA表达的影响 | 第34-35页 |
| 4.5 阿维菌素对王鸽组织MBD2基因mRNA表达的影响 | 第35-37页 |
| 5 结论 | 第37-38页 |
| 致谢 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-49页 |
| 附录 | 第49-53页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第53页 |
