| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 1 文献综述 | 第16-24页 |
| 1.1 胡杨抗盐机理研究 | 第16-18页 |
| 1.1.1 离子平衡调控 | 第16-17页 |
| 1.1.2 离子区隔化 | 第17页 |
| 1.1.3 活性氧平衡调控 | 第17页 |
| 1.1.4 组织肉质化 | 第17-18页 |
| 1.2 植物质膜H~+-ATPase的研究 | 第18-19页 |
| 1.3 热激蛋白DnaJ homologue 3研究进展 | 第19-22页 |
| 1.3.1 热激蛋白 | 第19-20页 |
| 1.3.2 J-蛋白的概念、结构和功能 | 第20-21页 |
| 1.3.3 拟南芥中J-蛋白的研究 | 第21页 |
| 1.3.4 J3与PKS5相互作用调控质膜H~+-ATPase活性 | 第21-22页 |
| 1.4 RPM1-interacting protein 4蛋白复合体研究进展 | 第22-23页 |
| 1.5 本研究的意义 | 第23-24页 |
| 2 PeJ3基因的克隆与生理生化功能分析 | 第24-55页 |
| 2.1 PeJ3基因对盐胁迫的响应 | 第24-27页 |
| 2.1.1 实验材料、和试剂仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.1.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.1.1.2 试剂 | 第24页 |
| 2.1.1.3 溶液配制 | 第24页 |
| 2.1.1.4 实验所需仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.2 实验方法和步骤 | 第25-27页 |
| 2.1.2.1 实验材料处理方法 | 第25页 |
| 2.1.2.2 胡杨RNA的提取 | 第25页 |
| 2.1.2.3 胡杨cDNA的合成 | 第25-26页 |
| 2.1.2.4 荧光定量PCR | 第26-27页 |
| 2.1.3 结果 | 第27页 |
| 2.1.4 讨论 | 第27页 |
| 2.2 PeJ3基因的克隆和生物信息学分析 | 第27-34页 |
| 2.2.1 实验材料、试剂和仪器 | 第27-28页 |
| 2.2.1.1 实验材料 | 第27页 |
| 2.2.1.2 试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.1.3 溶液配制 | 第28页 |
| 2.2.1.4 实验所需仪器和软件 | 第28页 |
| 2.2.2 实验方法和步骤 | 第28-30页 |
| 2.2.2.1 胡杨RNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.2.2 胡杨cDNA的合成 | 第28页 |
| 2.2.2.3 胡杨PeJ3 CDS区的克隆 | 第28-29页 |
| 2.2.2.4 克隆所得基因连接T载体 | 第29-30页 |
| 2.2.2.5 连接产物转化大肠杆菌 | 第30页 |
| 2.2.3 结果 | 第30-34页 |
| 2.2.3.1 胡杨叶片RNA质量检测 | 第30-31页 |
| 2.2.3.2 克隆PeJ3基因 | 第31页 |
| 2.2.3.3 PeJ3基因的生物信息学分析 | 第31-34页 |
| 2.2.4 讨论 | 第34页 |
| 2.3 植物表达载体的构建和拟南芥的转化 | 第34-40页 |
| 2.3.1 实验材料、试剂和仪器 | 第34-35页 |
| 2.3.1.1 实验材料 | 第34页 |
| 2.3.1.2 试剂 | 第34页 |
| 2.3.1.3 溶液配制 | 第34-35页 |
| 2.3.1.4 实验所需仪器 | 第35页 |
| 2.3.2 实验方法和步骤 | 第35-38页 |
| 2.3.2.1 植物表达载体pCAMBIA2300-PeJ3的构建 | 第35-37页 |
| 2.3.2.2 表达载体质粒转化农杆菌和载体鉴定 | 第37页 |
| 2.3.2.3 拟南芥种植和培养方法 | 第37-38页 |
| 2.3.2.4 沾花法侵染拟南芥 | 第38页 |
| 2.3.3 结果 | 第38-40页 |
| 2.3.3.1 表达载体的构建及鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.3.2 野生型拟南芥的侵染 | 第39-40页 |
| 2.3.4 讨论 | 第40页 |
| 2.4 转PeJ3基因阳性植株和纯合子的筛选鉴定 | 第40-43页 |
| 2.4.1 实验材料、试剂和仪器 | 第40页 |
| 2.4.1.1 实验材料 | 第40页 |
| 2.4.1.2 试剂 | 第40页 |
| 2.4.1.3 溶液配制 | 第40页 |
| 2.4.2 实验方法和步骤 | 第40-41页 |
| 2.4.2.1 转PeJ3基因T1代植株的基因组鉴定 | 第40-41页 |
| 2.4.2.2 转PeJ3基因纯合子的筛选 | 第41页 |
| 2.4.3 结果 | 第41-43页 |
| 2.4.3.1 拟南芥阳性植株的鉴定 | 第41-42页 |
| 2.4.3.2 转基因拟南芥纯合子的获得 | 第42-43页 |
| 2.4.4 讨论 | 第43页 |
| 2.5 转PeJ3基因拟南芥表达量和耐盐表型分析 | 第43-47页 |
| 2.5.1 实验材料、试剂和仪器 | 第43页 |
| 2.5.1.1 实验材料 | 第43页 |
| 2.5.1.2 试剂 | 第43页 |
| 2.5.1.3 溶液配制 | 第43页 |
| 2.5.2 实验方法和步骤 | 第43-45页 |
| 2.5.2.1 转基因拟南芥株系中PeJ3基因的表达量 | 第43-44页 |
| 2.5.2.2 转PeJ3基因拟南芥耐盐表型分析 | 第44-45页 |
| 2.5.3 结果 | 第45-46页 |
| 2.5.3.1 PeJ3在拟南芥受体植株中的表达 | 第45页 |
| 2.5.3.2 转PeJ3基因拟南芥耐盐表型 | 第45-46页 |
| 2.5.4 讨论 | 第46-47页 |
| 2.6 H_2O_2对PeJ3基因表达量的影响 | 第47-48页 |
| 2.6.1 实验材料和试剂 | 第47页 |
| 2.6.1.1 实验材料 | 第47页 |
| 2.6.1.2 溶液配制 | 第47页 |
| 2.6.2 实验方法和步骤 | 第47页 |
| 2.6.2.1 H_2O_2处理胡杨细胞 | 第47页 |
| 2.6.2.2 胡杨细胞cDNA的制备及荧光定量PCR | 第47页 |
| 2.6.3 结果 | 第47-48页 |
| 2.6.4 讨论 | 第48页 |
| 2.7 转PeJ3基因拟南芥质膜H~+-ATPase活性分析 | 第48-52页 |
| 2.7.1 实验材料、试剂和仪器 | 第48-49页 |
| 2.7.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 2.7.1.2 溶液配制 | 第48-49页 |
| 2.7.1.3 实验所需仪器 | 第49页 |
| 2.7.2 实验方法和步骤 | 第49-51页 |
| 2.7.2.1 拟南芥质膜微囊的提取和纯化 | 第49-50页 |
| 2.7.2.2 质膜H~+-ATPase水解活性的测定 | 第50-51页 |
| 2.7.3 结果 | 第51页 |
| 2.7.4 讨论 | 第51-52页 |
| 2.8 转PeJ3基因拟南芥盐诱导H~+离子流数据分析 | 第52-54页 |
| 2.8.1 实验材料、试剂和仪器 | 第52页 |
| 2.8.1.1 实验材料 | 第52页 |
| 2.8.1.2 试剂 | 第52页 |
| 2.8.1.3 溶液配制 | 第52页 |
| 2.8.1.4 实验所需仪器 | 第52页 |
| 2.8.2 实验方法和步骤 | 第52-53页 |
| 2.8.2.1 电极的制作和校正 | 第53页 |
| 2.8.2.2 H~+离子流的测量和数据处理 | 第53页 |
| 2.8.3 结果 | 第53-54页 |
| 2.8.4 讨论 | 第54页 |
| 2.9 小结 | 第54-55页 |
| 3 PeRIN4基因的克隆与生理生化功能分析 | 第55-70页 |
| 3.1 PeRIN4基因的克隆和生物信息学分析 | 第55-58页 |
| 3.1.1 实验材料、试剂和仪器 | 第55页 |
| 3.1.2 实验方法和步骤 | 第55页 |
| 3.1.3 结果 | 第55-58页 |
| 3.1.3.1 克隆PeRIN4基因 | 第55页 |
| 3.1.3.2 PeRIN4基因的生物信息学分析 | 第55-58页 |
| 3.1.4 讨论 | 第58页 |
| 3.2 PeRIN4的亚细胞定位 | 第58-62页 |
| 3.2.1 实验材料、试剂和仪器 | 第58页 |
| 3.2.1.1 实验材料 | 第58页 |
| 3.2.1.2 试剂 | 第58页 |
| 3.2.1.3 溶液配制 | 第58页 |
| 3.2.1.4 实验所需仪器 | 第58页 |
| 3.2.2 实验方法和步骤 | 第58-60页 |
| 3.2.2.1 定位表达载体pGreen0029-PeRIN4的构建和鉴定 | 第58-59页 |
| 3.2.2.2 拟南芥叶肉细胞原生质体瞬时转化 | 第59-60页 |
| 3.2.2.3 激光共聚焦显微镜观测荧光 | 第60页 |
| 3.2.3 结果 | 第60-61页 |
| 3.2.3.1 定位表达载体pGreen0029-PeRIN4构建以及鉴定 | 第60页 |
| 3.2.3.2 PeRIN4的亚细胞定位 | 第60-61页 |
| 3.2.4 讨论 | 第61-62页 |
| 3.3 植物表达载体的构建和拟南芥的转化 | 第62-63页 |
| 3.3.1 实验材料、试剂和仪器 | 第62页 |
| 3.3.2 实验方法和步骤 | 第62页 |
| 3.3.3 结果 | 第62-63页 |
| 3.4 转PeRIN4基因阳性植株和纯合子的筛选鉴定 | 第63-65页 |
| 3.4.1 实验材料、试剂和仪器 | 第63页 |
| 3.4.2 实验方法和步骤 | 第63页 |
| 3.4.3 结果 | 第63-65页 |
| 3.4.3.1 拟南芥PeRIN4转化植株的鉴定 | 第63-64页 |
| 3.4.3.2 转基因拟南芥纯合子的获得 | 第64-65页 |
| 3.5 转PeRIN4基因拟南芥表达量和耐盐表型分析 | 第65-67页 |
| 3.5.1 实验材料、试剂和仪器 | 第65页 |
| 3.5.2 实验方法和步骤 | 第65页 |
| 3.5.3 结果 | 第65-67页 |
| 3.5.3.1 转基因拟南芥株系中PeRIN4基因的表达 | 第65页 |
| 3.5.3.2 转PeRIN4基因拟南芥耐盐表型分析 | 第65-67页 |
| 3.5.4 讨论 | 第67页 |
| 3.6 转PeRIN4基因拟南芥质膜H~+-ATPase活性分析 | 第67-68页 |
| 3.6.1 实验材料、试剂和仪器 | 第67页 |
| 3.6.2 实验方法和步骤 | 第67页 |
| 3.6.3 结果 | 第67-68页 |
| 3.7 转PeRIN4基因拟南芥盐诱导H~+离子流数据分析 | 第68页 |
| 3.7.1 实验材料、试剂和仪器 | 第68页 |
| 3.7.2 实验方法和步骤 | 第68页 |
| 3.7.3 结果 | 第68页 |
| 3.8 小结 | 第68-70页 |
| 4 结论、创新点与展望 | 第70-72页 |
| 4.1 结论 | 第70页 |
| 4.2 创新点 | 第70页 |
| 4.3 展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 个人简介 | 第79-80页 |
| 导师简介 | 第80-83页 |
| 硕士在读期间成果清单 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
