| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第13-31页 |
| 1.1 Na~+/H~+逆向转运蛋白及 NHX 基因研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1.1 Na~+/H~+逆向转运蛋白及 NHX 基因发现 | 第13页 |
| 1.1.2 Na~+/H~+逆向转运蛋白的生理功能及分子特征 | 第13-14页 |
| 1.1.3 Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的克隆 | 第14-15页 |
| 1.1.4 不同植物 NHX 基因的同源性分析 | 第15-16页 |
| 1.1.5 NHX 基因与植物的耐盐性 | 第16-17页 |
| 1.2 刺槐组织培养研究进展 | 第17-22页 |
| 1.2.1 芽和茎段培养 | 第17-19页 |
| 1.2.2 叶片、叶柄和子叶培养 | 第19-21页 |
| 1.2.3 胚培养 | 第21页 |
| 1.2.4 花药培养 | 第21-22页 |
| 1.2.5 形成层培养 | 第22页 |
| 1.2.6 细胞悬浮培养 | 第22页 |
| 1.3 植物基因工程研究进展 | 第22-30页 |
| 1.3.1 目的基因的种类 | 第23-26页 |
| 1.3.1.1 抗虫基因 | 第23-24页 |
| 1.3.1.2 抗病基因 | 第24页 |
| 1.3.1.3 抗逆基因 | 第24-25页 |
| 1.3.1.4 品质改良基因 | 第25-26页 |
| 1.3.2 植物转基因技术 | 第26-27页 |
| 1.3.2.1 化学法 | 第26页 |
| 1.3.2.2 物理法 | 第26页 |
| 1.3.2.3 生物法 | 第26-27页 |
| 1.3.3 植物遗传转化受体系统 | 第27-28页 |
| 1.3.3.1 愈伤组织受体系统 | 第27页 |
| 1.3.3.2 直接分化芽受体系统 | 第27-28页 |
| 1.3.3.3 原生质体受体系统 | 第28页 |
| 1.3.3.4 胚状体受体系统 | 第28页 |
| 1.3.4 转基因植株的筛选和鉴定 | 第28页 |
| 1.3.5 木本植物基因工程研究进展 | 第28-30页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第30-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-44页 |
| 2.1 试验材料 | 第31-34页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第31页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第31-32页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第32页 |
| 2.1.4 常用试剂的配制 | 第32-33页 |
| 2.1.5 PCR 引物 | 第33-34页 |
| 2.1.6 制备不含 DNA 酶的 RNA 酶 | 第34页 |
| 2.2 研究方法 | 第34-44页 |
| 2.2.1 刺槐遗传转化受体系统的建立 | 第34-36页 |
| 2.2.1.1 无菌材料的获得 | 第34页 |
| 2.2.1.2 基本培养基对形成层诱导愈伤的影响 | 第34页 |
| 2.2.1.3 6 -BA 和 NAA 对形成层诱导愈伤的影响 | 第34-35页 |
| 2.2.1.4 生长素对愈伤组织分化的影响 | 第35页 |
| 2.2.1.5 细胞分裂素对愈伤组织分化的影响 | 第35页 |
| 2.2.1.6 TDZ 对愈伤组织分化的影响 | 第35页 |
| 2.2.1.7 带芽茎段为外植体的刺槐再生 | 第35页 |
| 2.2.1.8 生根培养 | 第35-36页 |
| 2.2.2 不同抗生素对刺槐遗传转化受体系统的影响 | 第36页 |
| 2.2.2.1 不同抗生素对农杆菌的抑制作用 | 第36页 |
| 2.2.2.2 抗生素对刺槐形成层愈伤组织诱导的影响 | 第36页 |
| 2.2.2.3 Kan 对刺槐形成层愈伤组织分化的影响 | 第36页 |
| 2.2.2.4 Kan 对刺槐瓶苗生根的影响 | 第36页 |
| 2.2.3 工程菌的制备 | 第36-42页 |
| 2.2.3.1 材料获取及刺槐根总 RNA 提取 | 第36-37页 |
| 2.2.3.2 RNA 甲醛变性凝胶电泳检测 | 第37-38页 |
| 2.2.3.3 反转录合成 cDNA 第一条链 | 第38页 |
| 2.2.3.4 目的基因 RpNHX1 分离 | 第38-39页 |
| 2.2.3.5 PCR 产物琼脂糖凝胶电泳检测 | 第39页 |
| 2.2.3.6 DNA 片段与克隆载体的连接与转化 | 第39-40页 |
| 2.2.3.7 碱法大量提取质粒（10 mL） | 第40-41页 |
| 2.2.3.8 Sal I、Xba I 双酶切和 T4连接 | 第41-42页 |
| 2.2.3.9 LBA4404 感受态制备和转化 | 第42页 |
| 2.2.4 农杆菌介导的刺槐转 RpNHX1 基因 | 第42-44页 |
| 2.2.4.1 工程菌的培养 | 第42-43页 |
| 2.2.4.2 侵染 | 第43页 |
| 2.2.4.3 菌液浓度的选择 | 第43页 |
| 2.2.4.4 侵染时间的选择 | 第43页 |
| 2.2.4.5 共培养时间的选择 | 第43页 |
| 2.2.4.6 添加乙酰丁香酮（As）对刺槐遗传转化的影响 | 第43页 |
| 2.2.4.7 选择培养 | 第43页 |
| 2.2.4.8 转基因植株的 PCR 检测 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-58页 |
| 3.1 刺槐遗传转化受体系统建立 | 第44-49页 |
| 3.1.1 基本培养基对形成层愈伤诱导的影响 | 第44页 |
| 3.1.2 6-BA 和 NAA 对形成层诱导愈伤的影响 | 第44-45页 |
| 3.1.3 生长素对愈伤组织分化的影响 | 第45-46页 |
| 3.1.4 细胞分裂素对愈伤组织分化的影响 | 第46-47页 |
| 3.1.5 TDZ 对愈伤组织分化的影响 | 第47-48页 |
| 3.1.6 直接分化芽诱导 | 第48页 |
| 3.1.7 生根培养 | 第48-49页 |
| 3.1.8 不同添加物在刺槐组织培养过程中的作用 | 第49页 |
| 3.2 不同抗生素对刺槐遗传转化受体系统的影响 | 第49-52页 |
| 3.2.1 不同抗生素对农杆菌的抑制作用 | 第49-50页 |
| 3.2.2 不同抗生素对形成层愈伤组织诱导的影响 | 第50-51页 |
| 3.2.3 Kan 对刺槐形成层愈伤组织分化的影响 | 第51-52页 |
| 3.2.4 Kan 对瓶苗生根的影响 | 第52页 |
| 3.3 工程菌的制备 | 第52-56页 |
| 3.3.1 刺槐根总 RNA 的提取 | 第52-53页 |
| 3.3.2 RpNHX1 基因全长的克隆及序列分析 | 第53-55页 |
| 3.3.3 表达载体 PBI121-RpNHX1 的构建 | 第55-56页 |
| 3.4 农杆菌介导的刺槐转 RpNHX1 基因 | 第56-58页 |
| 3.4.1 菌液浓度对刺槐遗传转化的影响 | 第56页 |
| 3.4.2 侵染时间对刺槐遗传转化的影响 | 第56页 |
| 3.4.3 共培养时间对刺槐遗传转化的影响 | 第56-57页 |
| 3.4.4 As 对刺槐遗传转化的影响 | 第57页 |
| 3.4.5 抗性植株的 PCR 检测 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| 4.1 Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的应用及刺槐耐盐性的提高 | 第58页 |
| 4.2 建立刺槐遗传转化受体系统的讨论 | 第58-59页 |
| 4.3 抗生素在刺槐遗传转化过程中的应用 | 第59-60页 |
| 4.4 优化刺槐遗传转化条件的讨论 | 第60-61页 |
| 5 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 附录 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第73页 |
