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核桃JrWRKY4和JrWRKY21转录因子对胶胞炭疽菌侵染响应的研究

符号说明第4-8页
中文摘要第8-10页
Abstract第10-11页
1 引言第12-24页
    1.1 WRKY转录因子研究进展第12-18页
        1.1.1 WRKY转录因子的结构与分类第13-15页
        1.1.2 WRKY转录因子的进化第15-16页
        1.1.3 WRKY转录因子的生物学功能第16-18页
            1.1.3.1 WRKY转录因子在非生物胁迫中的作用第16-17页
            1.1.3.2 WRKY转录因子在生物胁迫中的作用第17-18页
            1.1.3.3 WRKY转录因子参与其他生理过程第18页
    1.2 核桃炭疽病研究进展第18-22页
        1.2.1 核桃炭疽病及其危害第19-21页
        1.2.2 核桃炭疽病的防治研究第21页
        1.2.3 核桃抗炭疽病基因研究第21-22页
    1.3 本研究的目的意义第22-23页
    1.4 技术路线图第23-24页
2 材料与方法第24-37页
    2.1 材料第24-26页
        2.1.1 植物材料第24页
        2.1.2 供试菌株和载体第24页
        2.1.3 酶及主要试剂第24页
        2.1.4 主要仪器设备第24-25页
        2.1.5 引物第25-26页
    2.2 实验方法第26-37页
        2.2.1 生物信息学分析第26页
        2.2.2 植物材料的处理第26-27页
        2.2.3 植物总RNA的提取第27-28页
            2.2.3.1 RNA的提取第27页
            2.2.3.2 RNA质量检测第27-28页
        2.2.4 cDNA第一链的合成第28-29页
        2.2.5 JrWRKY4和JrWRKY21转录因子的克隆第29页
        2.2.6 PCR产物的回收第29-30页
        2.2.7 T载体的连接第30页
        2.2.8 荧光定量PCR分析第30-31页
            2.2.8.1 反转录第30-31页
            2.2.8.2 实时荧光定量分析第31页
        2.2.9 转化大肠杆菌第31页
        2.2.10 PCR检测阳性克隆第31-32页
        2.2.11 质粒的提取第32-33页
        2.2.12 质粒酶切第33页
        2.2.13 构建表达载体第33页
        2.2.14 转化农杆菌第33-34页
        2.2.15 亚细胞定位实验第34-35页
        2.2.16 转基因拟南芥第35-37页
            2.2.16.1 拟南芥的侵染第35页
            2.2.16.2 转基因拟南芥的筛选和鉴定第35-37页
            2.2.16.3 转基因拟南芥的炭疽病抗性鉴定第37页
3 结果第37-60页
    3.1 核桃WRKY转录因子家族的生物信息学分析第37-45页
        3.1.1 核桃WRKY转录因子的序列特征分析第37-41页
        3.1.2 核桃WRKY转录因子系统进化分析第41-42页
        3.1.3 核桃WRKY转录因子保守元件分析第42-45页
    3.2 JrWRKY4和JrWRKY21转录因子的克隆和序列特征分析第45-49页
    3.3 核桃JrWRKY4和JrWRKY21蛋白同源比对与进化分析第49-52页
    3.4 JrWRKY4和JrWRKY21的表达模式分析第52-54页
    3.5 亚细胞定位第54-55页
    3.6 转基因拟南芥的炭疽病抗性实验第55-60页
        3.6.1 转基因拟南芥的筛选与鉴定第55-58页
            3.6.1.1 卡那霉素筛选第55-56页
            3.6.1.2 PCR检测转基因植株第56-57页
            3.6.1.3 qRT–PCR技术筛选转基因拟南芥株系第57-58页
        3.6.2 转JrWRKY4和JrWRKY21拟南芥对炭疽病抗性的检测第58-60页
4 讨论第60-63页
    4.1 核桃WRKY转录因子家族生物信息学分析第60-61页
    4.2 核桃JrWRKY4和JrWRKY21转录因子的克隆与序列分析第61-62页
    4.3 核桃JrWRKY4和JrWRKY21转录因子表达模式分析第62页
    4.4 转基因拟南芥对炭疽病抗性分析第62-63页
5 结论第63-64页
参考文献第64-75页
附录第75-76页
致谢第76页

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